非洲猪瘟LAMP检测试剂盒

特别提示：包括非洲猪瘟LAMP检测试剂盒(TaqMan探针法,8联管装)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：非洲猪瘟LAMP检测试剂盒(TaqMan探针法,8联管装)
英文名称：Lyophilized ASFV LAMP Kit(TaqMan Probe)
产品货号：MT015801B
产品规格：48T

本试剂盒基于LAMP-TaqMan技术，以非洲猪瘟VP72外膜蛋白基因靶标，采用8联管形式，使用方便，不受样品数限制。加入20μL溶解液后，再加入1μl模板即可上机反应。适合样品量较少、或练习等试验。适合恒温荧光检测仪，野外检测用。目前仅提供透明0.2ml EP管，因此不适用于BioRad、Roche等定量PCR机型。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，因其具有的快速扩增能力，使其成为诊断试剂的明星潜力技术。但发展至今近20年时间，其仍然无法在诊断试剂领域获得广泛应用。LAMP技术的突出问题就是其假阳性、非特异扩增严重，无法产生高特异性信号。将类似标准定量PCR中的TaqMan探针技术应用到LAMP检测中，一直是分子生物家追求的目标。

我司依托强大的工具酶开发背景，首次开发出具有强链置换能力、高效DNA合成能力、具有外切活性的Bst DNA聚合酶5.0，无论以DNA为模板还是以RNA为模板，均可实现60～65℃恒温条件下类似TaqMan PCR方法的扩增。整个检测时间通常在15~25min内即可完成检测。应用该项技术后，在利用LAMP快速、高灵敏度、恒温检测优点的基础上，彻底解决了LAMP技术的假阳性问题。将TaqMan探针应用于LAMP扩增体系后，为LAMP技术更加广泛的应用于临床诊断奠定了坚实的基础。

试剂盒特点：
 

• 快速检测：可在15~25min内完成检测。
  灵敏度高：可稳定的检测到单拷贝。
  特异性高：六条特异性引物和一条TaqMan探针，保证了产物的特异性和检测的可靠性。
  操作简单：恒温检测。
  匹配便携式小型设备、可野外操作
  适合粗样品的检测，无需核酸纯化制备。

试剂盒组成：
 

组分	规格(48T)
LAMP TaqMan Buffer 2D	1ml
ASFV LAMP TaqMan Assay (8联管)	48管
ASFV阳性标准品（105Copy/μl）	1支

保存：ASFV LAMP TaqMan Assay为冻干品0.2ml透明EP管单支形式（不适用于需要白管的定量PCR仪，如ROCHE、BioRad机型）。冻干品中内含Bst5.0 DNA聚合酶、dNTP、扩增引物、探针。该制品可置于室温保存15天，-20℃长期保存（推荐保存温度）。

使用说明：

一、试剂盒性能说明：
 

• 靶标基因及探针：针对非洲猪瘟VP72外膜蛋白。
• 试剂盒灵敏度：试剂盒灵敏度与反应时间相关。
   

  60℃反应时间	检测灵敏度
  15min	10 Copy
  25min（推荐反应时间）	2 Copy
  35min	1 Copy

• 防污染的说明：LAMP反应高度敏感，反应结束后，务必不要打开管盖，以防止气溶胶污染。一旦发生气溶胶污染，请使用我司的DNA气溶胶污染去除剂（货号：MT3001）进行环境清理。

二、仪器和程序设置
LAMP TaqMan的检测可以使用标准定量PCR仪（也可使用恒温荧光设备），探针报告基团为FAM。
注意：该试剂在需要白色EP管的定量PCR仪机型中（BioRad、Roche），性能有所衰减。该类机型上的实验，请选用西林瓶装试剂，并自行准备白色EP反应管。
使用定量PCR仪进行LAMP TaqMan扩增程序如下：
步骤1：60℃ 10s
步骤2：60℃ 50s收集信号，循环25次
总反应时间为25min。

三、使用方法
 

• 溶解阳性标准品
  阳性标准品为干粉形式，首次使用前加入100μl的ddH2O，漩涡10s溶解后，保存于-20℃。溶解后的制品浓度为10⁵copy/μl，每次实验时采用1μl即可。
• 配置反应体系
  小心打开0.2ml EP管盖，向每支冻干品中加入20μl LAMP TaqMan Buffer 2D，并加入1μl检测模板DNA。盖上管盖，轻弹离心管（或漩涡1s），溶解冻干制品。并短暂离心，置于荧光定量PCR仪（或恒温仪）上进行反应即可。

四、结果判读
 

• 结果判读成立条件
  阴性水对照不起峰、阳性标准品在10~14min起峰条件下结果判读有效。
• 阳性结果判读
  有扩增曲线，判定为阳性。在25min以后起峰但不明显的情况下，通常Copy数小于2copy。需要进行复核实验，仍然起峰的情况，表明为阳性。否则表明为阴性。
• 阴性结果判读
  平线表明为阴性样本。

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