无内毒素质粒小提试剂盒(1-5ml)

特别提示：包括无内毒素质粒小提试剂盒(1-5ml)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：无内毒素质粒小提试剂盒(1-5ml)
英文名称：EndoFree Plasmid Mini Kit
产品货号：WE0411
产品规格：50T

内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒提供一种简单、快捷、高效提取无内毒素质粒的新方法，提取的质粒最大限度去除内毒素，并能有效去除基因组DNA、RNA、蛋白等污染，操作简单方便。
本试剂盒适合提取1-5ml菌液，在碱裂解法裂解细胞的基础上，通过新型硅基质膜高效专一的结合质粒DNA，每个吸附柱最高可吸附40μg的质粒DNA，同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤柱，有效去除内毒素、蛋白等杂质。由本试剂盒所得质粒纯度高、质量稳定，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序,PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等下游实验。
试剂盒组成：
 

组份	50次
Buffer P1	15mL
Buffer P2	15mL
Buffer E3	15mL
Buffer PS	15mL
Buffer PW(浓缩液)	10mL
Endo-Free Buffer EB	10mL
RNase A(10mg/ml)	150μL
过滤柱FM及收集管	50套
吸附柱DL及收集管	50套

保存条件：RT
自备试剂：
无水乙醇、异丙醇。
实验前准备及重要注意事项：
1、所有组分可在干燥、室温(15-30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2-8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1置于2-8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2-8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意不要直接接触Buffer P2和Buffer E3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤：
1、取1-5ml过夜培养的菌液，加入离心管(自备)中,13,000rpm(～16,200×g)离心30秒收集细菌，尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
【注】：
● 如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250μL Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8-10次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
【注】：
● 温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
4、向离心管中加入250μL Buffer E3，立即上下颠倒混匀8-10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。13,000rpm离心5分钟，吸取上清，将上清加入过滤柱中,13,000rpm离心1分钟过滤，滤液收集在离心管(自备)中。
【注】：
● Buffer E3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、向滤液中加入225μL异丙醇，上下颠倒混匀。
6、柱平衡：向已装入收集管的吸附柱中加入200μL Buffer PS,13,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、13,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
【注】：
● 吸附柱的最大容积为750μL，如果样品体积大于750μL可分批加入。
9、向吸附柱中加入750μL Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),13,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
10、将吸附柱重新放回收集管中,13,000rpm离心1分钟。
【注】：
● 这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的收集管中，向吸附膜的中间部位加入50-100μL Endo-Free Buffer EB，室温放置2-5分钟,13,000rpm离心2分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
【注】：
● 为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟,13,000rpm离心2分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
● 质粒拷贝数较低或＞10kb时,Endo-Free Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。

根据您的关注的无内毒素质粒小提试剂盒(1-5ml)，您可能还对以下产品有需求：


SV0847 Q5 定点突变试剂盒（不含感受态细胞） 10次
SV0867 Taq 2X Master Mix 500次(50μl体系)
SV0973 PreCR 修复混合液 150次|30次
SV0985 rNTP混合液 每种50μmol|每种10μmol
SV0998 phi29 DNA 聚合酶反应缓冲液 6ml
SV1324 彩色预染蛋白 Standard，宽范围 （11–245 kDa） 500gel lanes|100gel lanes|50gel lanes
SV1492 快速肽 N-糖苷酶 F 50次

关注无内毒素质粒小提试剂盒(1-5ml)，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：



名称：稀释液 B
货号：SV0824
规格：5ml|5ml
概述:
如果在使用过程中需要稀释内切酶，建议稀释后浓度不要低于 1,000units/ml。详细信息请参见 282 页，根据内切酶产品货号查阅限制性内切酶的稀释兼容性表选择稀释液的种类，表中列出了所有内切酶所需稀释液种类。
贮存条件:
-20℃。
稀释液成分:
稀释液A:
50mM KCl，10mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，1mM dithiothreitol，200 μg/ml BSA，50% 甘油(pH 7.4 @
25℃)。
稀释液B:
300mM NaCl，10mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，1mM dithiothreitol，500 μg/ml BSA，50% 甘油(pH 7.4 @25℃)。
稀释液C:
250mM NaCl，10mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，1mM dithiothreitol，0.15% Triton X-100，200 μg/ml BSA，50% 甘油(pH 7.4 @ 25℃)。
注意:以上稀释液不能用于稀释嗜热聚合酶。

名称：BalbBuffer 3.1 （10X）
货号：SV0829
规格：5ml|1.25ml
概述:
为确保内切酶发挥 100%的酶切活性，我公司随酶免费提供10X 反应缓冲液(BalbBuffer)。绝大多数内切酶配有四种标准反应缓冲液中的一种，但有些内切酶配有特殊的反应缓冲液。四种标准反应缓冲液具有不同颜色标记，以便实验者使用方便。
了解有关反应缓冲液兼容性信息，请参见282页。
贮存条件:
BSA [20mM Tris-HCl，100mM KCl，0.1mM EDTA，50% 甘油(pH 8.0 @ 25℃)]。
BalbBuffer、BSA和SAM 均贮存于 -20℃。
BalbBuffer 成分:
BalbBuffer 1.1(黄):
10mM Bis Tris Propane-HCl，10mM MgCl2，100 μg/ml BSA(pH 7.0 @ 25℃)。
BalbBuffer 2.1(蓝):
50mM NaCl，10mM Tris-HCl，10mM MgCl2，100 μg/ml BSA(pH 7.9 @ 25℃)。
BalbBuffer 3.1(红):
100mM NaCl，50mM Tris-HCl，10mM MgCl2，100 μg/ml BSA(pH 7.9 @ 25℃)。
CutSmart Buffer(绿):
50mM Potassium acetate，20mM Tris-acetate，10mM Magnesium acetate，100 μg/ml BSA(pH 7.9 @ 25℃)。
注意:使用前，反应缓冲液(BalbBuffer)应彻底融化并混匀。

北京百奥莱博科技有限公司一家专注于生命科学研究领域的生物技术公司，坚持“质量至上，服务为本，全心全意助力生命科学”的理念，为广大用于提供稳定、可靠、专业的产品和服务支持，产品线包括分子生物学，细胞生物学，免疫检测，抗体，重组蛋白，血液制品等系列。“忙忙碌碌的平凡，铸就事业的不凡”。让我们携起手来，共同创造生命科学的蓬勃发展。