快速DNA提取扩增试剂盒

特别提示：包括快速DNA提取扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：快速DNA提取扩增试剂盒
英文名称：DNALyse Amplification Kit
产品货号：WE0409
产品规格：50T

本试剂盒采用独特的缓冲体系，包含了快速制备基因组DNA和PCR扩增的所有试剂，适用于从各种动植物组织、细菌中一步提取基因组DNA并用于PCR扩增。整个提取过程无需液氮研磨，无需有机溶剂抽提，无需无水乙醇沉淀，提取的DNA质量稳定。
本试剂盒提供的2×PCR MasterMix是一种兼容性强的PCR试剂，能够高效特异扩增DNA样品，该试剂包括DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂等。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，特别适合于高通量的筛选。
试剂盒组成：
 

组份	50次
Buffer SA	15mL
2×PCR MasterMix	1mL
蛋白酶K	12.5mg
蛋白酶K储存液	1.25mL

【注】：
● 2×PCR Master Mix含有Taq DNA Polymerase,2×Taq PCR Buffer,3mM MgCl2和400μM dNTP mix。

保存条件：
2×PCR MasterMix -20℃，其他组分室温(15-30℃)。

实验前准备及重要注意事项：
1、向12.5mg蛋白酶K中加入0.625mL蛋白酶K储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K溶液勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、使用前请检查Buffer SA是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀出现，请将Buffer SA于56℃水浴重新溶解。
4、本产品提供的PCR MasterMix为2×，使用时需加入模板和引物，并加入RNase-Free Water补足体积，使其浓度为1×即可进行反应。
操作步骤：
1、取材：
植物材料：取约10mg样本于离心管(自备)中；
动物材料：取约10mg样本于离心管(自备)中；
细菌：取生长状态良好的菌液200-800μL于离心管(自备)中，收集菌体。
2、加入200μL Buffer SA，涡旋混匀。
【注】：
● 如果是植物叶片和动物组织，应尽量用研磨杵研磨：如果是植物种子，应事先破碎并研细；细菌可直接涡旋裂解。
3、加入10μL蛋白酶K溶液，混匀,56℃孵育10分钟,95℃处理5分钟。
【注】：
● 如果为动物组织样本，可适当延长56℃孵育时间至30分钟；鼠尾组织应56℃孵育5-6小时；如有未完全消化的任何组织，应在下一步离心后尽量彻底去除。
● 95℃处理时注意不要超过5分钟。
4、13,000rpm(～17,900×g)，离心5分钟。
5、转移上清至新的离心管(自备)中，直接用于PCR扩增，或4℃或-20℃保存溶液。
6、PCR扩增：
1)PCR反应体系：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
 

试剂	20μL体系	终浓度
2×PCR MasterMix	10μL	1×
Forward Primer,10μM	1μL	0.4μM
Reverse Primer,10μM	1μL	0.4μM
Template DNA	1-2μL
RNase-free Water	up to 20μL

【注】：
● 引物浓度请以终浓度0.2-0.6μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2）PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2min
变性	94℃	30s	30-40个循环
退火	55-65℃	30s
延伸	72℃	60s
终延伸	72℃	5min

【注】：
● 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
● 延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本产品中所包含的Taq DNA Polymerase的扩增效率为1kb/30s。
● 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
3)结果检测：反应结束后取5μL反应产物，直接进行琼脂糖凝胶电泳检测。

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