耐热型T7 RNA聚合酶

特别提示：包括耐热型T7 RNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：耐热型T7 RNA聚合酶
英文名称：Thermostable T7 RNA Polymerase
产品货号：MT0130
产品规格：5000U|25000U

我公司提供两种T7 RNA聚合酶：野生型T7 RNA聚合酶（MT0129）和耐热型T7 RNA聚合酶（MT0130）。与野生型噬菌体T7 RNA聚合酶相比，耐热T7 RNA聚合酶可在更高的温度下进行体外转录。它可在37-52℃条件下进行高效的体外转录，最佳温度为37℃，50℃反应条件下仍然保留50%以上的活性，而野生型在此温度下无活性。基于耐热的体外转录反应特性具有以下优势：
① 提升了GC含量较高RNA的转录效率；
② 提升了长片段RNA的合成能力；
③ 在使用帽类似物时，提高了共转录的加帽效率；
④ 减少了dsRNA副产物的形成，降低了合成RNA的免疫原性;
⑤ 提升NASBA和CRISPR核酸扩增检测性能。该系列酶均来自重组E.coli BL21菌株纯化而得，无核酸酶污染。

应用实例：
1．野生型和耐热型T7 RNA聚合酶的耐热性能比较。以20ng DNA作为模板，分别在反应体系（20μl）中加入100U的T7 RNA聚合酶和耐热型T7 RNA聚合酶进行体外转录，结果可见耐热型T7 RNA聚合酶在50℃仍具有较高活性，而野生型T7 RNA聚合酶在该温度下没有活性。


2．热稳定无机焦磷酸酶对转录产量的影响。在反应体系（20μl）中加入0.02U的热稳定无机焦磷酸酶（货号：MT0099）可显著提高转录产物的产量。


3．以不同大小的线性化质粒作为模板，应用耐热型T7 RNA聚合酶进行转录性能测试。由结果可见：耐热型T7 RNA聚合酶在50℃条件下仍具有理想的转录活性。


4．以不同大小的PCR产物作为模板，应用耐热型T7 RNA聚合酶进行转录性能测试。由结果可见：耐热型T7 RNA聚合酶可有效转录>5000nt的RNA分子。


产品组成：
 

组分	5000U	25000U
Thermostable T7 RNA Polymerase (50U/μl)	100μL	500μL
5×T7 Transcription Buffer	1mL	1mL×5

储存：-20℃可保存2年，避免反复冻融。

1×T7 Transcription Buffer：
40mM Tris (pH7.8),20mM NaCl,18mM MgCl2,2mM Spermidine HCl,10mM DTT。

贮存液：
10mM Tris-HCl,0.1M NaCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,50% Glycerol,0.01% (w/v) Triton X-100。

活性定义：
在标准反应体系下，50℃ 1小时内将1nmol的ATP掺入酸不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位。

热失活：75℃，10min。

其它体外转录辅助试剂：
 

名称	货号
rNTP混合液（25mM Each）	MT0121
RNase Inhibitor（40U/μl）	MT0014
RNase-Free DNase I	MT0090
耐热无机焦磷酸酶	MT0099
RNA快速纯化试剂盒	MT0126
Poly(A)聚合酶	MT0004

使用方法：

1．配制反应体系
 

成分	用量
5×T7 Transcription buffer	4μL
rNTP Mixture（25mM each）	3.2μL
Linearized template DNA	0.2～1μg
RNase Inhibitor（40U/μl）	0.5μL
Thermostable T7 RNA Polymerase (50U/μl)	1～2μL
RNase-Free H2O	up to 20μl

2．50℃孵育1-3h。

3．使用RNase-Free Dnase I去除DNA模板（可选）在体外转录反应结束后，向上述20μl反应液中加入5μl的10×RD Buffer和2μl RNase-Free DNase I(10U/μl)，并加入23μl的RNase-Free H2O至50μl，37℃孵育15min。

4．转录产物的纯化，体外转录产物可选用RNA快速纯化试剂盒进行柱式纯化，以去除多余的盐、蛋白等杂质。也可以采用经典的LiCl沉淀法。

注意事项：
1．转录DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。
2．转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-lǜ仿抽提的质粒DNA为最佳模板。
3．该酶对高浓度NaCl或KCl不耐受，当其浓度高于150mM时，其活性受到显著抑制（~50%）。
4．在20μl反应体系中加入0.02U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量（提高25～50%）。

根据您的关注的耐热型T7 RNA聚合酶，耐热T7 RNA聚合酶，热稳定T7 RNA聚合酶，您可能还对以下产品有需求：


BTN51206 Taq DNA聚合酶 500U
YT005 RNase A (10mg/ml)(不含DNase) 1ml
SV0181 BsiHKAI限制性内切酶 5KU|5KU|1KU
SV0332 EciI限制性内切酶 500U|100U
SV0360 EcoRV-HF限制性内切酶 20KU|20KU|4KU|4KU|2KU
SV0437 HpyAV限制性内切酶 500U|100U
SV0445 KasI限制性内切酶 1250U|250U
SV0544 NlaIII限制性内切酶 2500U|500U|250U

关注耐热型T7 RNA聚合酶，耐热T7 RNA聚合酶，热稳定T7 RNA聚合酶的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：



名称：尿嘧啶切刻酶
货号：BTN130666
规格：50U
本产品在尿嘧啶位置产生一个单核苷酸缺口，它是尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)和DNA糖基化酶-裂解酶 Endo Ⅷ的混合物。UDG催化尿嘧啶碱基的切割，形成一个脱碱基(脱嘧啶)位点，但保持磷酸二酯骨架结构完整。Endo Ⅷ的裂解酶活力使脱碱基位点 3′和5′端的磷酸二酯键断裂，释放无碱基的脱氧核糖。其反应示意图如下：


产品特点：
1．PCR产物的克隆；
2．在DNA的尿嘧啶处产生缺口。

产品组成：
 

成份	规格
尿嘧啶切刻酶(1000U/mL)	50μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在10μl反应体系中，37℃条件下，15分钟使10pmol的含有单一尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链产生切刻所需要的酶量。

名称：溶菌酶
货号：WE0214
规格：100mg

名称：BtsCI限制性内切酶
货号：SV0282
规格：10KU|2KU
在不同反应缓冲液的活性
BalbBuffer 1.1: 10%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 25%
CutSmart Buffer: 100%
特性
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件
CutSmart 缓冲液，50℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度
20,000units/ml。
37℃ 时活性
50%。
甲基化敏感性
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项
BtsCl是BstF5l的完全同裂酶，是 Fokl的不完全同裂酶。

北京百奥莱博科技有限公司一家专注于生命科学研究领域的生物技术公司，坚持“质量至上，服务为本，全心全意助力生命科学”的理念，为广大用于提供稳定、可靠、专业的产品和服务支持，产品线包括分子生物学，细胞生物学，免疫检测，抗体，重组蛋白，血液制品等系列。“忙忙碌碌的平凡，铸就事业的不凡”。让我们携起手来，共同创造生命科学的蓬勃发展。