Benzonase核酸酶(无内毒素)

特别提示：包括Benzonase核酸酶(无内毒素)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Benzonase核酸酶(无内毒素)
英文名称：Benzonase Nuclease(Endotoxin free)
产品货号：MT0169
产品规格：25KU|100KU|5000KU

Benzonase Nuclease是一种核酸内切酶，可将核酸降解成2~5个碱基的5‘单磷酸核苷酸，因其能高效降解任何形式（双链，单链，线状，环状）的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性，又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度，去除蛋白样品中核酸的污染，且无蛋白酶活性残留，核酸酶活性达1×10⁶U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时，也具有多种其他用途，如：减少了样品处理时间，增加了蛋白产量，离心时时沉淀和上清分离的更彻底，更便于溶液的离心（尤其是超滤）；提高色谱纯化的效率等。

本公司Benzonase核酸酶包括以下四种：
 

名称	货号
Benzonase核酸酶	MT0068
Benzonase核酸酶(无内毒素)	MT0169
Benzonase核酸酶(Strep II标签)	MT0170
Benzonase核酸酶(Strep II标签，无内毒素)	MT0171

不同Benzonase核酸酶的用途及用量推荐：
 

实验类型	电泳蛋白样品制备	非药物蛋白生产	药物蛋白生产	疫苗、病毒生产	细胞药物
推荐货号	MT0068：科研试剂	MT0068：科研试剂 MT0170：Strep II标签	MT0169：无内毒素 MT0171：无内毒素，Strep II标签
细胞数量	1X106个细胞(10mg组织)	1g湿重（重悬液10mL）		1L发酵上清液	1L培养物
最低用量	125U(0.5μL)	25U/mL(1μL)	25U/mL(1μL)	0.1U/mL(0.4μL)	0.1U/mL(0.4μL)
推荐用量	500U(2μL)	250U/mL(10μL)	250U/mL(10μL)	25U/mL(100μL)	5U/mL(20μL)
作用时间	通常作用时间37℃在15~60min；25℃在30~120min；

带Strep II标签核酸酶可在消化完核酸后通过Strep Tactin XT Resin（货号：MT0180）高效去除。

无内毒素的两种Benzonase核酸酶，内毒素含量<40EU/mL（按照单位换算量计算为，每1000U中含有的内毒素<0.15EU），符合FDA关于核酸污染的处理规程，可适用于药用级别的研发和生产。

另外，核酸酶残留可通过我公司开发的基于荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测试剂盒(MT0181)进行评测，15min即可完成检测，最低可检测到2ng/ml的核酸酶残留。

单位定义：
37℃，pH8.0反应条件下，在30分钟内使△A260值降低1.0(相当于完全消化37μg DNA)的酶量定义为一个活性单位。
注意：含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品，对该酶活性有部分抑制作用，使用时需要增加酶的用量。

Benzonase核酸酶的应用：
 

• 蛋白提取时去除核酸污染：在重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时，Benzonase核酸酶可有效降低样品粘度，利于下游操作；
• 与细胞或细菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白质产量；
• 减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象；
• 降解核酸，利于不可溶性蛋白复性前高质量包涵体制备；
• 有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响，改善蛋白质的分离效果，增强2-DE分辨率；
• 疫苗和病毒样品制备中DNA污染的去除。

Benzonase核酸酶的应用实例分析：

 

图1：分别取不同量（0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U）的Benzonase核酸酶消化人基因组DNA10min，进行琼脂糖电泳。	图2：A为未加Benzonase处理的，B为加Benzonase处理的样品进行二维电泳。如图所示，Benzonase处理的样品可显著增加二维电泳的分辨率。
图3：经RIPA裂解未经Benzonase核酸酶处理的样品，大量基因组DNA释放出来，呈鼻涕状。	图4：离心后，左管为未加Bezonase核酸酶，有鼻涕状粘稠物质悬浮在管中，右管为加Bezonase核酸酶，上清为透明液体。

Benzonase核酸酶具有超强兼容性：
Benzonase核酸酶在非常广泛的条件下，都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性，这使其能够与多种细胞裂解液，如RIPA，或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如：>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性，1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性，5mM的EDTA会使活性丧失90%，1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。浓度<0.4%的Triton?X-100对核酸酶活性几乎无影响，<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性，超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低，1%的浓度会使活性丧失70%；0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响，而SDS浓度在0.1%-1%之间时，核酸酶在变性后活性会急剧降低，可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外，核酸酶可耐受6M尿素，当尿素达到7M时，核酸酶在变性后活性会急剧降低，亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。
 

条件参数	最适条件	可作用条件范围
Mg2+	1-2mM	1-10mM
pH	8.0–9.2	6–10
温度	37℃	0–42℃
DTT	0–100mM	＞100mM
β-Mercaptoethanol	0–100mM	＞100mM
一价阳离子浓度（如Na+，K+）	0–20mM	0–150mM
PO43-	0–10mM	0–100mM

Benzonase核酸酶残留去除：
对于Strep II标签的Benzonase核酸酶（MT0170，MT0171）可通过Strep Tactin XT Resin（MT0180）直接去除，去除率>95%；对于不带标签的Benzonase核酸酶（MT0068，MT0169），可通过色谱纯化去除核酸酶，然后可通过核酸酶残留检测试剂盒（MT0181）或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质，具体的Benzonase去除条件如下表：

 

阴离子交换介质	pH	样品和平衡缓冲液	Benzonase核酸酶
TMAE	7.0	50mM Tris/200mM NaCl	not bound
TMAE	7.0	50mM Tris/50mM NaCl	not bound
TMAE	8.0	50mM Tris/250mM NaCl	not bound
TMAE	8.0	＞50mM Tris/100mM NaCl	not bound
TMAE	9.0	＞50mM Tris/200mM NaCl	not bound
TMAE	9.0	50mM Tris/100mM NaCl	not bound
DEAE	7.0	50mM Tris/200mM NaCl	not bound
DEAE	7.0	50mM Tris/50mM NaCl	not bound
DEAE	8.0	50mM Tris/250mM NaCl	not bound
DEAE	8.0	＞50mM Tris/100mM NaCl	not bound
DEAE	9.0	＞50mM Tris/250mM NaCl	not bound
DEAE	9.0	50mM Tris/50mM NaCl	not bound
DMAE	8.0	＞50mM Tris/250mM NaCl	not bound
DMAE	8.0	50mM Tris/50mM NaCl	not bound
阳离子交换介质	pH	样品和平衡缓冲液	Benzonase核酸酶
SO3-	6.0	20mM phosphate/100mM NaCl	bound
SO3-	6.0	20mM phosphate/200mM NaCl	not bound
SO3-	5.0	20mM acetate/200mM NaCl	bound
SO3-	5.0	＞20mM acetate/700mM NaCl	not bound
SO3-	4.0	＞20mM acetate/300mM NaCl	bound
SO3-	4.0	20mM acetate/800mM NaCl	not bound
C00-	6.0	20mM phosphate/0mM NaCl	not bound
C00-	5.0	20mM acetate/40mM NaCl	bound
C00-	5.0	20mM acetate/100mM NaCl	not bound
C00-	4.0	＞20mM acetate/150mM NaCl	partially bound
C00-	4.0	20mM acetate/400mM NaCl	not bound

Benzonase核酸酶(无内毒素，货号MT0169)广泛应用于以下用途：
 

• 蛋白提取时去除核酸污染
• 2D凝胶电泳
• Western Blot
• 生物制药
• 疫苗生产

根据您的关注的Benzonase核酸酶(无内毒素)，RNA降解酶，DNA降解酶，核酸降解酶，工业级核酸酶，全能核酸降解酶，广谱核酸酶，非限制性核酸内切酶，全能核酸酶，您可能还对以下产品有需求：


BTN120506 T4聚核苷酸激酶 250U
WE0213 DNase I(不含RNase) 1000U
SV0024 AflIII限制性内切酶 1250U|250U|125U
SV0248 BstBI限制性内切酶 12500U|2500U|1250U
SV1370 RNase If 25KU|5KU
SV1378 5′ AppDNA/RNA 热稳定连接酶 50次|10次
WH0168 Klenow片段（3"-5"exo-,低浓度) 2.5kU|10kU
GS2091 EcoRV内切酶 2kU

关注Benzonase核酸酶(无内毒素)，RNA降解酶，DNA降解酶，核酸降解酶，工业级核酸酶，全能核酸降解酶，广谱核酸酶，非限制性核酸内切酶，全能核酸酶的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：



名称：BalbRT M-MuLV反转录酶
货号：YT392
规格：2000U
本制品是一种经过改造和优化的M-MuLV反转录酶。和普通的M-MuLV反转录酶相同，BalbRT M-MuLV反转录酶也是一种依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶，可以以RNA或DNA为模板在引物存在的情况下完成互补DNA链的合成；同时具有Ribonuclease H(RNase H)酶活性，可以选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，但不剪切单链RNA或双链RNA。

特点：
 

• BalbRT M-MuLV反转录酶可以合成长达13kb的cDNA，而普通的M-MuLV反转录酶仅能合成长达9kb的cDNA；
• BalbRT M-MuLV反转录酶的最适反应温度为42℃并且在50℃时仍然有很高活性，可以避免普通的M-MuLV反转录酶在37℃反应时的一些不足。

用途：
 

• BalbRT M-MuLV反转录酶常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。
• BalbRT M-MuLV反转录酶合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。
• BalbRT M-MuLV反转录酶也可以用于DNA探针的标记，以及通过引物延伸(primerextention)来分析RNA。

产品组成：
 

组分	规格
BalbRT M-MuLV反转录酶(200U/μl)	2000U
5×Reaction Buffer	0.2ml

保存条件：-20℃保存。

来源：
本BalbRT M-MuLV反转录酶由大肠杆菌表达，表达的基因为经过突变优化的编码Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase的pol基因片段。

活性定义：
One unit of the enzyme incorporates 1nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10min at 37℃.

活性检测条件：
50mM Tris-HCl(pH8.3),6mM MgCl₂,10mM DTT,40mM KCl,0.5mM dTTP,0.4 MBq/ml [³H]-dTTP,0.4mM polyA·oligo(dT)_12-18。

质量控制：
不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含BalbRT M-MuLV反转录酶本身含有的RNase H酶活力以外的RNA酶，满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。

酶储存液：
50mM Tris,pH8.3,100mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT,0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。

5×Reaction Buffer：
250mM Tris,pH8.3 at 25℃,250mM KCl,20mM MgCl₂,50mM DTT。

失活或抑制：
70℃孵育10分钟可以导致BalbRT M-MuLV反转录酶失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对BalbRT M-MuLV反转录酶有抑制作用。

使用说明：

1．cDNA第一条链的合成：
 

• 参考如下表格设置反转录反应：
   

  模板(后面3种任选一种)	Total RNA	0.1-5μg
  	或Poly(A) RNA/mRNA	10-500ng
  	或Specific RNA	0.01pg-500ng
  引物(后面3种任选一种)	Oligo(dT)18	0.5μg (或100pmol)
  	random hexamer	0.2μg (或100pmol)
  	Gene specific primer	15-25pmol
  DEPC-treated Water	－	To 13.7μl①
  Reaction Buffer (5X)	－	4μl
  RNase Inhibitor	－	0.5μl②
  dNTP Mix (25mM each)	－	0.8μl③
  BalbRT M-MuLV反转录酶	－	1μl
  总体积		20μl

  
  ① To 13.7μl表示加入DEPC-treated Water至最终体积为13.7μl。
  注意：对于GC含量比较高的RNA模板的反转录反应，加入DEPC-treated Water混匀后微离心，接着可以在65℃孵育5分钟，随后立即置于冰浴以打开RNA的一些比较稳定的二级结构。
  ② RNase Inhibitor可以视其本身的情况加入适当的量，例如0.5μl或其他适当体积。在加入其他体积时，DEPC-treated Water的用量需适当调整。
  ③ dNTP浓度不同时使用的体积需作适当调整，此时DEPC-treated Water的用量需适当调整。
• 轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀)，随后离心沉淀液体。
• 如果使用Oligo(dT)₁₈作为引物或使用基因特异性引物，在42℃孵育60分钟。如果使用random hexamer(随机六聚体)作为引物，先在25℃孵育10分钟，随后在42℃孵育60分钟。注意：对于GC含量比较高的RNA模板的反转录反应，可以设置为45℃孵育60分钟。
• 70℃孵育10分钟以失活BalbRT M-MuLV反转录酶并终止反转录反应。说明：对于长片段的cDNA不推荐采用加热的方法失活BalbRT M-MuLV反转录酶，这种操作可能会导致部分长片段DNA被剪切。
• 反转录产物可以直接用于后续的PCR等反应，也可以-20℃冻存以备以后使用。用于后续PCR反应时，如果PCR的反应体系为50微升，则推荐使用2微升反转录产物。

2．其他用途请自行参考M-MuLV反转录酶的相关文献资料进行。

常见问题：

1．总RNA反转录产物电泳观察不到。
反转录产物由于是从模板反转录而获得，而模板的量本身比较低，反转录的量通常还要少于模板量，因此通常总RNA的反转录产物直接电泳观察是观察不到的。
2．反转录产物通过PCR扩增没有特异性条带。
PCR扩增没有获得特异性条带时建议先使用actin、GAPDH等作为内参进行PCR扩增，看是否可以成功扩增。如果可以成功，则说明PCR扩增体系没有问题，此时通常是目的基因的引物设计欠佳，当然也有可能是反转录产物质量欠佳。如果内参不能被很好地扩增，则有可能PCR体系存在问题或反转录产物质量欠佳。

北京百奥莱博科技有限公司一家专注于生命科学研究领域的生物技术公司，坚持“质量至上，服务为本，全心全意助力生命科学”的理念，为广大用于提供稳定、可靠、专业的产品和服务支持，产品线包括分子生物学，细胞生物学，免疫检测，抗体，重组蛋白，血液制品等系列。“忙忙碌碌的平凡，铸就事业的不凡”。让我们携起手来，共同创造生命科学的蓬勃发展。