OTG橙绿变色管

特别提示：包括OTG橙绿变色管在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：OTG橙绿变色管
产品货号：MT2100
产品规格：48支



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BTN90302 25mM氯化镁溶液(PCR级MgCl2溶液) 5mL
BTN61203 PCR级高GC的DNA清除剂 1.5mL
BTN131179 核酸稀释液，测OD专用 250mL
WE0111 BaldStar Taq DNA Polymerase 500U|2500U
WE0126 防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶) 1ml
WE0138 一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(低含量ROX校正染料) 100次
RFT098 Long Taq DNA聚合酶 500U|5×500U

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名称：PCR Mix染料
货号：BTN131212
规格：10mL
本产品可加入到PCR反应液中，使PCR产物可直接上样电泳，其分子量相当于50bp大小的DNA片段，不干扰观察。
注：本产品不是PCR荧光染料，是一类可见光染料(类似电泳用的溴酚蓝，二甲苯蓝等指示剂)

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

名称：一管式双链cDNA合成试剂盒
货号：BTN130308
规格：10次
本产品是用于一管式双链cDNA合成的试剂盒。cDNA第一链合成的原理是以OligodT为通用引物的、MMLV催化的逆转录反应。其原理如下：


cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链，其原理图如下：


产品特点：
1. 即开即用，含有合成两条cDNA链的所有试剂。
2.适用于含poly rA的RNA，对不含poly rA的RNA(如细菌RNA)，不能使用本试剂盒制备ds cDNA。
3.一管式进行，第一链cDNA合成后不需要任何处理，直接进入第二链的合成。
4. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
5. 本试剂盒足够10次80μL体系的双链cDNA合成反应。
6. 如果需要合成全长cDNA，最好选用SMART全长cDNA双链合成试剂盒。

试剂盒组成：
 

成分	规格
Oligo dT引物	10μl
cDNA第一链合成缓冲液	40μl
MMLV 逆转录酶(200U/μL)	10μl
5×cDNA 第二链合成缓冲液	160μl
20×cDNA 第二链合成酶混合液	40μl
T4 DNA聚合酶	20μl
0.2 M EDTA溶液	40μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：mRNA的制备
本试剂盒不提供mRNA提取试剂，用户需自备相关试剂。

二：双链cDNA的合成
1.在一个干净的塑料离心管中，按下表设置cDNA合成反应：
 

成分	用量
自备mRNA样品	4μl(0.5-2μg)
Oligo dT引物	1μL
70℃ 2分钟后室温放置2分钟，短暂离心
cDNA 第一链合成缓冲液	4μL
MMLV 逆转录酶	1μL
轻柔吹打混匀后42℃保温90分钟合成第一链cDNA
超纯水	48μL
cDNA 第二链合成缓冲液	16μL
cDNA 第二链合成酶混合液	4μL
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时
自备的T4 DNA聚合酶	2μL
轻柔吹打混匀后，16℃继续保温30分钟
0.2M EDTA溶液	4μL

注：如果不需要将双链cDNA平末端化，则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等实验。

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