TdT末端转移酶

特别提示：包括TdT末端转移酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：TdT末端转移酶
英文名称：Terminal Transferase
产品货号：MT0132
产品规格：500U|2500U

TdT末端转移酶是一种不依赖于模板的DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3’羟基端。带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子均可作为TdT的底物，加尾长度可达5～300nt。该TdT末端转移酶分子量为58.3kDa，无5"和3"核酸外切酶活性，反应中加入Co²⁺可提高加尾效率。该酶广泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修饰碱基（如ddNTP，DIG-dUTP）标记DNA 3’末端、TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（细胞凋亡的原位检测）等试验。该酶经检测无DNA内切酶和外切酶污染，不含RNase。

产品应用：
· 寡核苷酸或DNA 3’羟基末端标记；
· DNA末端加尾(DNA tailing)；
· 5’-RACE；
· 合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链。

产品组成：
 

组分	500U	2500U
Terminal Transferase (20U/μl)	25μl	125μl
10×TdT Buffer	1ml	1ml
10mM CoCl2	250μl	250μl

储存：-20℃可保存3年。

1×TdT Buffer：
100mM KCl,30mM Tris-acera,0.05% (v/v) Triton X-100 (pH7.5 at 25℃)

活性定义：37℃，60分钟内，催化1nmol?dNTP加入到多聚核苷酸3’羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位

热失活：75℃ 20min。

注意事项：
1．适量EDTA可使Terminal Transferase的活性丧失。
2．金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘例子和磷酸根离子均对Terminal Transferase活性具有抑制作用。

反应实例：

1．配制反应体系
 






 

成分	用量
Terminal Transferase (20U/μl)	2μL
10×TdT Buffer	5μL
10mM CoCl2	5μL
DNA	5pmol
10mM dATP（或其它标记物）	0.5μL
ddH2O	Up to 50μL

2．37℃孵育30min。
3．75℃ 20min失活。

注意事项：
1．适量EDTA可使Terminal Transferase的活性丧失。
2．金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘例子和磷酸根离子均对Terminal Transferase活性具有抑制作用。

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名称：β-琼脂糖酶Ⅰ
货号：BTN120623
规格：100U
 β-琼脂糖酶切割琼脂糖亚单位或未置换的新琼脂乙糖(3,6-酐-α-L-吡喃型半乳糖基-1-3-D-半乳糖)生成新琼脂-寡糖(1)。β-琼脂糖酶 I 消化琼脂糖，形成不能再成胶的碳水化合物分子，同时释放所俘获的DNA。通常残留的碳水化合物分子或β-琼脂糖酶 I 不会影响随后的限制性内切酶消化、连接反应及转化反应等 DNA操作。反应原理如下：

 本产品来源重组E.coli菌株，此菌株的质粒上携带有β-琼脂糖酶I的基因编码。
 本产品无核酸内、外切酶或核酸酶污染，可用于从琼脂糖凝胶中提取DNA。

活性单位定义：1单位指42℃、1小时条件下，消化200μl低熔点琼脂糖或NuSieve琼脂糖生成可溶性新琼脂-寡糖所需的酶量。

热失活：95℃,2分钟或65℃,15分钟温育可使50单位的β-琼脂糖酶I失活。β-琼脂糖酶I可以在45-50℃保持几个小时的活性。反应体系中存在琼脂糖可以稳定β-琼
脂糖酶I。

储存条件：低温运输，-20℃ 保存，有效期一年。

备注：
➤ 琼脂糖：由于在反应温度42℃条件下，溶液必需要呈液态，所以仅低熔点琼脂糖适合于用β-琼脂糖酶I消化。
➤ pH值的敏感性：β-琼脂糖酶I在pH6.5时有最适酶活力，在pH5.0-8.5范围内可以保持>75%的酶活力。
➤ 对盐的敏感性：NaCl或Na2 EDTA浓度在50到500mM之间不影响β-琼脂糖酶I活性。

名称：T4 RNA连接酶
货号：YT407
规格：200U
本酶来源于由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体，是一种ATP-依赖的可以催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5"-P末端与3"-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。

T4 RNA连接酶主要用于RNA和RNA之间的连接，连接时需要5"磷酸基团和3"羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接，也可以进行RNA分子(最短8个碱基)的环化连接。可以用于RNA和单核苷酸之间的连接，单核苷酸必须为5"和3"均磷酸化的形式，此时常用于RNA的3"末端标记。也可以用于DNA和RNA之间的连接。当DNA提供5"磷酸基团，RNA提供3"羟基时，连接效率较高；当DNA提供3"羟基，RNA提供5"磷酸基团时，连接效率非常低。也可以用于DNA和DNA之间的连接，但连接效率非常低。主要用于DNA的环化连接，例如5" RACE中的cDNA环化。DNA和DNA之间的连接尽管可以进行，但比较困难。

用途：
用RNA 3"末端标记；RNA和RNA分子间连接；
寡核苷酸的环化；tRNA修饰；
5" RACE中寡核苷酸连接到cDNA单链；
在蛋白质特定位点引入非天然氨基酸。

活性定义：37℃30分钟内，催化1 nmol 5"-[32P]-(A)12-18成为磷酸酶不能消化的环形产物所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5"-[32P]-(A)12-18(10μM in 5"-termini)。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
酶储存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。

产品组份：
T4 RNA Ligase(10U/μl)————200U
Reaction Buffer(10X)—————40μl
ATP(10mM)——————————40μl
BSA(1mg/ml)—————————40μl

Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。
失活或抑制：70℃加热10分钟可使T4 RNA Ligase失活。

储存条件：-20℃

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