BAPAT SYBR qPCR Mix

特别提示：包括BAPAT SYBR qPCR Mix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BAPAT SYBR qPCR Mix
英文名称：2×BAPAT SYBR qPCR Mix
产品货号：MT2002
产品规格：1ml|5ml|25ml

BAPAT SYBR qPCR Mix是采用SYBR Green嵌合荧光法进行Real-Time PCR的专用试剂，本SYBR qPCR Mix将化学修饰的热启动BAPAT DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP、SYBR Green染料等试剂预混在一起，是一种2×浓度的单组分预混试剂。该制品配有单独的ROX内参染料，可用于需要ROX进行孔间校正的定量PCR仪。

BAPAT DNA聚合酶为电子进化改造的第三代DNA聚合酶，其对杂质的耐受性能明显提升，包括乙醇、胍盐、肝素、SYBR Green染料、MLV，因此无论采用基因组DNA、反转录cDNA、纯度欠佳的核酸样本都具有理想的扩增效果。优化的反应Buffer和100%热启动性能，确保该试剂在信噪比、循环域值、线性度和灵敏度方面具有绝佳的性能。

产品特点：
 

• 杂质高耐受性，使用各种gDNA和cDNA，具有最佳的扩增成功率。


• 高灵敏度，宽范围的动态检测（大于7个数量级）。


• 反应效率在95-110%之间，高准确度和重现性。


• 扩增程序40min内完成，具有10s扩增1kb的快速能力。


• 在不同的富含AT和GC目标物上产生更高的荧光检测。

产品应用：
RNA转录产物cDNA、基因组DNA、DNA病毒等相对定量检测。

产品组成：
 

组分	1ml	5ml	25ml
2×BAPAT SYBR qPCR Mix	1ml	1ml×5	25mL
50×ROX Reference Dye	200μl	200μl	1ml

保存：请避光置于-20℃可保存3年。请避光置于-20℃以下可保存3年。该试剂经30次冻融后性能无下降，因此不使用时请置于-20℃避光保存。

反应实例：

以人Hela Total RNA的反转录产物进行GAPDH基因的定量PCR检测（7个数量级），模板量分别为100ng、10ng、1ng、100pg、10pg、1pg、100fg。结果可见BAPAT SYBR qPCR Mix在7个数量级的动态检测中表现出卓越的扩增性能。R²=0.999；Eff%=101；Error=0.025。

操作方法：

 

• 按照如下组分配制20μl PCR反应体系：
   

  组分	用量	终浓度
  2×BAPAT SYBR qPCR Mix	10μl	1×
  50×ROX Reference Dye	0.4μl/不加①	1×/-
  PCR Forward Primer(10μM)	0.4μl ②	0.2μM
  PCR Reverse Primer(10μM)	0.4μl ②	0.2μM
  DNA模板	0.5~2μl	-
  ddH2O	20μl	-

  
  注：
  
  ① 根据不同机型选择是否加入ROX染料：
  
  需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪，包括：
  ABI PRISM7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P(Stratagene)等。
  
  无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-TimePCR仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)；CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。
  
  ② 引物用量有时可提高到0.8μl以提高扩增效率。


 
• 进行Real-Time PCR反应，通常采用两步法，程序如下：
  
   

  步骤	温度	时间	循环数
  Stage 1	95℃	5min	1
  Stage 2	95℃	10s	40 cycles
  	60℃	20s
  Stage 3	Dissociation analysis

  
  注意：由于该酶为化学修饰的热启动BAPAT DNA聚合酶，必须于95℃加热5min才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短时间。


 
• 反应结束后确认Real-Time PCR的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。

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货号	名称	规格
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BTN131005	cDNA第二链合成试剂盒	30次
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SY0046	dNTP混合溶液(2.5 mM each)	1ml
QN0967	dNTPs Mix(2.5mM each)	1ml
HQF44	Direct One Tube RT-PCR试剂盒	100次|500次

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