特别提示:包括BAPAT HotStart DNA聚合酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:BAPAT HotStart DNA聚合酶
英文名称:BAPAT HotStart DNA Polymerase
产品货号:MT2001
产品规格:1KU|200KU
BAPAT HotStart DNA聚合酶为第三代DNA聚合酶,具有5"-3"外切酶活性,不具有3"-5’外切酶活性,其具有最高的杂质耐受性(对乙醇、胍盐、肝素具有极高的耐受性),因此对于纯度较差的DNA模板,该酶仍然可以获得理想的实验结果。
BAPAT HotStart DNA聚合酶为化学法修饰的热启动DNA聚合酶,其在50℃以下100%无活性,只有95℃条件下加热5min后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性PCR扩增,极大的提高了PCR扩增特异性和灵敏度。该酶配有独特的反应缓冲液,可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
产品特点:
快速扩增:具有6kb/min的扩增能力,1kb片段可在25min内完成扩增.
杂质高耐受性:全血、血清、培养细胞、尿液等样本直接进行PCR扩增,无需核酸纯化。
高特异性:采用独特的热启动技术,50℃以下无活性,仅有95℃加热5min才能恢复酶活。
高保真度:保真度是Taq DNA Polymerase的56倍。
长片段扩增:质粒、λ DNA等简单模板可以有效扩增>20 kb,基因组可以有效扩增>8 kb,cDNA可以有效扩增>8kb。
产品组成:
组分 |
1000U |
BAPAT HotStart DNA Polymerase(10U/μl) |
100μl |
5×BAPAT HotStart Buffer |
1ml×5 |
100mM Mg2+ |
1ml |
保存:-20℃可保存3年。
注意:
1.5×BAPAT HotStart Buffer中未添加Mg
2+,配制反应时应加入适当浓度的Mg
2+,推荐反应终浓度为2.5mM。
2.BAPAT HotStart DNA Polymerase (10U/μl)中含有40%浓度甘油,使用时应小心吸取。
单位定义:
一个活力单位即在在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
使用说明:
- 按照如下组分配制50μl PCR反应体系:
成分 |
用量 |
5×BAPAT HotStart Buffer |
10μl |
BAPAT HotStart DNA Polymerase (10U/μl) |
0.25μl |
dNTP Mixture (10mM each) |
0.5μl |
100mM Mg2+ |
1.25μl |
PCR Forward Primer(10μM) |
2μl |
PCR Reverse Primer(10μM) |
2μl |
DNA模板 |
X μl |
ddH2O |
至50μl |
注意:
(1)在50μl的PCR反应体系中BAPAT HotStart DNA Polymerase的用量可在0.1-0.5μl进行调整。
(2)Mg2+的浓度通常在2-4mM时可获得理想的扩增结果。
- qPCR扩增程序用两步法:
温度 |
时间 |
循环数 |
95℃ |
5min |
1 |
95℃ |
10s |
25-40 cycles |
60℃ |
30s |
注意:由于该酶为化学修饰的热启动BAPAT DNA聚合酶,必须于95℃加热5min才能恢复酶的活性,该热启动步骤不能缩短时间。
- 常规PCR三步法程序:
温度 |
时间 |
循环数 |
95℃ |
5min |
1 |
95℃ |
10s |
25-40 cycles |
50-60℃(退火) |
20s |
72℃ |
4kb/min |
72℃ |
5min |
1 |
注意:由于该酶为化学修饰的热启动BAPAT DNA聚合酶,必须于95℃加热5min才能恢复酶的活性,该热启动步骤不能缩短时间。
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名称:AscI限制性内切酶
货号:SV0058
规格:2500U|500U|250U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: <10%
BalbBuffer 2.1: 10%
BalbBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
名称:BlpI限制性内切酶
货号:SV0136
规格:2500U|500U|250U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 50%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,37℃。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
Blpl是Bpu1102l和Espl的完全同裂酶。
名称:BsaBI限制性内切酶
货号:SV0155
规格:10KU|2KU|1KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 50%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 75%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,60℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
37℃ 时活性20%。
甲基化敏感性:
对 dam 和哺乳动物 CpG甲基化敏感。
注意事项:
延时酶切条件下可能出现星号活性。
名称:BstXI限制性内切酶
货号:SV0266
规格:5KU|1KU|500U
在不同反应缓冲液的活性
BalbBuffer 1.1: <10%
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 25%
特性
重组酶、省时酶。
反应条件
BalbBuffer 3.1,37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度
10,000units/ml。
甲基化敏感性
对 dcm甲基化敏感。
注意事项
甘油浓度>5% 条件下可能出现星号活性。
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