SARS-CoV-2 RT-LAMP试剂盒(Orf1ab-N片段)

特别提示：包括SARS-CoV-2 RT-LAMP试剂盒(Orf1ab-N片段)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SARS-CoV-2 RT-LAMP试剂盒(Orf1ab-N片段)
英文名称：SARS-CoV-2 Orf1ab-N Visual RT-LAMP Kit
产品货号：BTN16-81930
产品规格：50次

本试剂盒基于环介导等温扩增（LAMP）技术，专门用于检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的Orf1ab-N片段。

试剂盒特点：
1．即开即用，用户只需要提供样品RNA。
2．用RT-LAMP恒温扩增法扩增新冠病毒Orf1ab-N片段，不需要荧光PCR等贵重仪器。
3．所用酶具有RT和LAMP活性，两步反应一步完成，扩增时间最多1h，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
4．检测灵敏性比PCR高10倍以上。
5．特异性高，由于使用四条针对Orf1ab-N片段的特异引物，比使用2条引物的PCR专一性更高。
6．提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
7．最低灵敏度在100拷贝/反应左右。
8．本试剂盒足够做50次20μL体系的RT-LAMP扩增。
9．本产品只能用于科研。

试剂盒组成：
 

组分	规格
2×Visual LAMP MagicMix	500μL
SARS-CoV-2 Orf1ab-N片段RT-LAMP引物混合液	200μL
SARS-CoV-2 Orf1ab-N片段RT-LAMP阳性对照 (1×107拷贝/μL)	50μL

保存条件：-20℃保存，保存期限为一年。新冠病毒Orf1ab-N片段RT-LAMP阳性对照最好单独放置，不要污染其他试剂。

使用方法：

一、样品RNA的制备
1．用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容，可以选购本公司的柱式病毒RNA提取试剂盒(BTN71001)。
2．如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。新冠病毒Orf1ab-N片段RT-LAMP阳性对照的1000倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照，然后和N个样品一起进行RNA提取操作，得到N+2个RNA样品。

二、RT-LAMP（20μL体系）
3．反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则最好设置N+4个RT-LAMP扩增，增加RT-LAMP阴性对照和阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
 

成分	N+2个 样品管	RT-LAMP 阴性对照管	RT-LAMP 阳性对照管
2×Visual LAMP MagicMix	各10μL	10μL	10μL
SARS-CoV-2 Orf1ab-N片段 RT-LAMP引物混合液	各4μL	4μL	4μL
N+2个样品RNA	各6μL	-	-
水	-	6μL	-
SARS-CoV-2 Orf1ab-N片段 RT-LAMP阳性对照的1000倍稀释液	-	-	6μL

4．混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。
5．61℃扩增60min。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并在管中加50μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。
6．80℃10min灭活Bst聚合酶和UNG酶。
7．将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。

三、实验结果分析
8．阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9号为阴性，10号为阳性，此处的9号和10号跟下步的电泳照片中的9号和10号是相同的两个样品）：

9．对不好判断的样品，可以电泳确认实验结果：取10μL RT-LAMP扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加Loading Buffer），最好使用100 bp DNA Marker。如果样品为阳性，将会得到梯形扩增产物。典型的电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品）。

10．注意消除环境污染，RT-LAMP产物易产生气溶胶，飘在空气中影响下一次实验，建议反应结束后，用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它溶液，到另一个房间添加阳性对照及样品，可有效防止引物、MagicMix被污染。

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