特别提示:包括Bsu DNA聚合酶,大片段在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:Bsu DNA聚合酶,大片段
英文名称:Bsu DNA Polymerase (Large Fragment)
产品货号:MT0190
产品规格:250U|2500U
Bsu DNA聚合酶是具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶,主要应用于RPA重组酶扩增。重组酶UvsX与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列;一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应,Bsu DNA聚合酶启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。
本产品为Bsu DNA聚合酶大片段,来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus subtilis),系将Bacillus subtilis DNA聚合酶(Bsu) I基因的前296个AA截去而得。该酶保留了Bsu I的5′-3′聚合酶活性,但是缺失了5′-3′核酸外切酶结构域,该大片段自身缺失3′-5′核酸外切酶活性,可用于重组酶扩增。
产品组成:
组分名称 |
250U |
2500U |
Bsu DNA Polymerase (Large fragment,5U/μl) |
50μl |
500μl |
10X Bsu Reaction Buffer |
1ml |
1ml×5 |
保存温度:置于-20℃可保存2年,避免反复冻融。
产品应用:
- 随机引物法标记;
- cDNA第二条链的合成;
- 单个dA的加尾;
- 链置换的DNA合成。
活性定义:
在37℃条件下,30min内参入10nmol酸性不容物定义为1个活性单位。
1X Bsu Reaction Buffer:
50mM NaCl,10mM Tris-HCl (Ph7.5),10mM MgCl2,1mM DTT
酶储存液:
50mM Tris-HCl,50mM KCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,20% Glycerol,pH7.5。
热失活:
75℃,20min。
注意:
- 由于缺乏3"-5"核酸外切酶活性,Bsu DNA聚合酶,大片段不能切除3"未配对的突出末端,因而不适用于生成平齐末端。
- 25℃时Bsu DNA聚合酶,大片段保留50%的活性,是同温度下Klenow片段(3"-5"exo-)的两倍。
性能测试:
按照如下体系配制反应:
成分 |
用量 |
Plasmid DNA |
100ng |
10×Bsu Reaction Buffer |
5μl |
Random9 (100μM) |
2μl |
dNTP mixture(10mM) |
2μl |
RNase free H2O |
up to 50μl |
混匀后95℃ 5min,然后冰上放置5min,分别加入不同剂量Bsu DNA聚合酶(泳道1-2:0,泳道3-4:0.5μl,泳道5-6:1μl,泳道7-8:2μl,泳道9-10:4μl,),分别在25℃和37℃孵育3h,电泳检测各组产物如下图
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