耐热RNase H

特别提示：包括耐热RNase H在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：耐热RNase H
英文名称：Thermostable RNase H
产品货号：MT0123
产品规格：500U

本耐热RNase H来源于极度耐热菌Thermus thermophilus.，可在较高温度下特异性地降解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键，而DNA链保持完整，故能降解RNA/DNA杂交链中的RNA链。与E.coli RNase H相比，该耐热RNase H在65℃以上具有更好的活性。由于具有极高的热稳定性，对于需要高温反应条件的分子生物学应用，耐热RNase H是一个理想的选择。本制品是经大肠杆菌重组表达纯化而得。

产品组成：
 

组分	规格
耐热RNase H(10U/μL)	50μL
10×RNase H Buffer	1mL

储存：置于-20℃，可保存3年。

10×RNase H Buffer：
750mM KCl
500mM Tris-HCl (pH8.3)
30mM MgCl₂
100mM DTT

单位定义：
1单位指50μl反应体系中，37℃条件下，20min内从40pmol长度为25bp的RNA-DNA杂交链中水解出1nmol核酸底物所需的酶量。

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名称：ATP依赖的DNase
货号：BTN120510
规格：200U
在含有ATP的Buffer反应体系中，本产品能够特异性地水解线性双链DNA产生脱氧核糖核酸，但对环状双链DNA不起作用。本产品可用于除去质粒或粘粒等环状DNA样品中残留的少量线性基因组DNA片段的污染，减少对后续实验的影响。在基因工程实验中，制备的质粒和粘粒，即使是通过氯化铯/溴乙锭梯度离心方法或其它严格的方法制备，也常含有碱裂解操作过程中带来的少量细菌基因组DNA片段的污染，尤其在制备低拷贝克隆载体的质粒或粘粒等时，这种现象更为明显，使用本产品即可以有效的去除这些污染。

产品特点：
1．使用本制品可以有效除去样品中的基因组DNA，然后通过70℃、5 min的加热处理即可使酶完全失活，从而减少基因组污染物对质粒或粘粒等的常规分析、亚克隆和序列测定等后续实验结果的影响。
2．此产品可用于低拷贝的质粒或粘粒的提取及除去质粒等环状DNA中线性基因组DNA污染物。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以线性化的pMD18 DNA为底物，在1mM ATP存在、pH9.4缓冲液中，37℃反应30分钟，催化生成1nmol脱氧核苷酸所需要的酶量，定义为1活性单位。在10μL反应体系中，加入本产品0.2 U，10×ATP依赖的DNA酶Buffer 1μL，0.2μg的线性化的pMD18 DNA，在37℃条件下反应30分钟，能够使线性化的pMD18 DNA产生95%以上的降解作用。

使用方法：
使用本产品除去 pUC18质粒中含有的大肠杆菌基因组DNA片段污染物(占60%)，可以提高阳性克隆的比率。

1．在微量离心管中配制下列反应液：
 

成分	样品	对照
10×反应Buffer	1μL	1μL
pUC18质粒DNA混合物	1μg	1μg
ATP依赖的DNA酶	2U	-
dH2O	Up to 10μL	Up to 10μL

2．37℃反应2小时。长时间反应效率有下降的倾向，建议反应时间1～2小时。
3．70℃加热5分钟，使ATP依赖的DNA酶失活。
4．在微量离心管中制备下列酶切反应液：
 

成分	用量
10×H Buffer(客户自备)	1μL
第3步反应液	5μL
EcoR I(客户自备)	30U
dH2O	Up to 10μL

5．37℃反应1小时之后，进行60℃ 15 min反应，使EcoR I失活。
6．在微量离心管中制备下列连接反应液：
 

成分	用量
10×T4 DNA Ligase Buffer(客户自备)	1μL
第5步酶切反应液	2μL
T4 DNA Ligase(客户自备)	350 U
dH2O	Up to 10μL

7．16℃反应1小时。

取上述连接反应液2～10μL，转化到JM109感受态细胞中，涂平板培养，进行蓝白菌落筛选并计数。实验结果表明，使用ATP依赖的DNA酶处理的pUC18质粒DNA混合物(含60％大肠杆菌基因组DNA片段)的自连结果中，白色菌落减少80%以上，有效抑制了大肠杆菌基因组DNA的污染。


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货号	名称	规格
BTN130621	Taq DNA连接酶	1000U
YT404	DNA末端平滑试剂盒	20次
SV0332	EciI限制性内切酶	500U|100U
SV0398	HincII限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0435	Hpy99I限制性内切酶	500U|100U
SV0507	MwoI限制性内切酶	2500U|500U|250U
SV0575	NspI限制性内切酶	1250U|250U

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