Sau DNA聚合酶，大片段

特别提示：包括Sau DNA聚合酶，大片段在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Sau DNA聚合酶，大片段
英文名称：Sau DNA Polymerase (Large Fragment)
产品货号：MT0192
产品规格：250|2500U

Sau DNA聚合酶（Sau DNA Polymerase）是具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶，主要应用于RPA重组酶扩增。重组酶UvsX与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列；一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应，Sau DNA聚合酶启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增，被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。

本产品为Sau DNA聚合酶大片段，来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) DNA聚合酶（Sau） I基因，是将其N端的1-293个AA截去而得。该酶保留了DNA聚合酶的5′-3′聚合酶活性，但是缺失了5′-3′和3‘-5’核酸外切酶活性，可用于重组酶扩增。

产品应用：
 

• 随机引物法标记；
• cDNA第二条链的合成；
• 单个dA的加尾；
• 链置换的DNA合成。

产品组成：
 

组分	250U	2500U
Sau DNA Polymerase (Large fragment,5U/μl)	50μl	500μl
10X Sau Reaction Buffer	1ml	1ml×5

保存温度：-20℃可保存2年，避免反复冻融。

活性定义：
在37℃条件下，30min内参入10nmol酸性不容物定义为1个活性单位。

1X Sau Reaction Buffer：
50mM NaCl，10mM Tris-HCl (Ph7.5),10mM MgCl₂,1mM DTT

酶储存液：
50mM Tris-HCl,50mM KCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,20% Glycerol,pH7.5。

热失活：
75℃，20min。

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货号	名称	规格
BTN131235	Klenow片段(3′→5′exo-)	200U
WE0225	RNase A溶液(100mg/ml)	1ml
SV0004	AbaSI限制性内切酶	1KU
SV0055	ApoI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0184	BsiWI限制性内切酶	1500U|300U|150U
SV0236	BssHII限制性内切酶	2500U|2500U|500U|250U
SV0480	MlyI限制性内切酶	5KU|1KU

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名称：Klenow片段(3′→5′exo-)
货号：BTN131235
规格：200U
Klenow片段是大肠杆菌DNA聚合酶I的蛋白水解产物。它保留了DNA聚合酶活性，具有3′→5′外切酶活性，但不具有5′→3′外切核酸酶活性。可以在DNA模板和引物存在的条件下，选择性地催化底物dNTP沿5′→3′方向合成与模板互补的DNA。本产品是重组表达得到。

产品用途：
1．双链DNA 5′突出末端的平滑化。
2．用随机引物制备探针。
3．随机引物标记法。
4．寡核苷酸定向诱变中双链DNA的合成。
5．双脱氧法DNA序列测定(Sanger法)。

产品组成：
 

成分	规格
Klenow片段(5U/μL)	20μl
10×Klenow Fragment Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以合成的Poly d(A-T)DNA为模板/引物，在37℃、pH7.4的条件下，30分钟内使10nmol的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

使用举例：(随机引物的同位素标记反应)
1．在微量离心管中配制下列反应液
 

成份	用量
模板DNA	25ng
随机引物(6-9mer)(1nmol/μl)	2μL
补超纯水到	14μL

2．95℃保温3分钟。然后冰中急冷5分钟。
3．加入2.5μl 10×Klenow Fragment Buffer。
4．加入2.5μl dNTP(0.2mM dATP,dGTP,dTTP)。
5．加入5μl 111TBq/mmol[α-32P].dCTP(3000 Ci/mmol)(1.85 MBq，50μCi)
6．加入1μl本产品，反应液共25μl。
7．37℃反应3小时。
8．65℃加热5分钟。
 反应液可直接作为探针使用。如有必要，可以通过用我司柱式探针纯化试剂盒除去未反应的标记的dCTP。

注意事项：
1．本酶有高度稳定性，稀释时不失活，但剧烈搅拌会失活。
2．由于不含有 5′→3′的外切核酸酶活性，因此没有切口平移活性。
3．可用于双链DNA末端以及缺口的修复。
4．与T4 DNA Polymerase相比，对模板高级结构的抵抗性能较好。
5．由于对DNA的亲和性较强，过量使用易发生凝集作用从而抑制反应进行。
6．若用于5′突出末端的修饰时，补平后有时会多加一个碱基。
7．与DNA Polymerase I相同，ddNTPs的掺入不受底物抑制。

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