极超灵敏ECL化学发光试剂盒

特别提示：包括极超灵敏ECL化学发光试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：极超灵敏ECL化学发光试剂盒
英文名称：BalbECL UT Kit For Western Blot
产品货号：YTB061
产品规格：100mL|500mL

本试剂盒是用作Western萤光检测试剂的一种极超敏的以luminol为基础的ECL化学发光试剂盒，发光效果显著优于BalbECL Star，可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶发生化学反应，发出萤光，从而可以通过用X光片压片或其它适当化学发光成像设备检测样品。

百奥莱博生产的Western萤光检测试剂目前共有三种，分别是YT060 BalbECL Plus、YT061 BalbECL Star和YTB061 BalbECL UT。常规的Western检测，优先推荐使用BalbECL Star。对于丰度比较高的目的蛋白的检测，例如内参蛋白等的检测，推荐使用性价比更高的BalbECL Plus。对于低丰度较难检测的目的蛋白，优先推荐使用检测灵敏度最高的BalbECL UT。但对于丰度适中的目的蛋白的检测，不太推荐使用BalbECL UT，因为使用BalbECL UT时由于检测灵敏度特别高，容易产生过曝的现象。

BalbECL UT灵敏度极高，Western blot检测效果与Thermo公司SuperSignal West Dura相当或略佳(参考图1)，化学发光效果在1小时内显著优于Thermo公司的SuperSignal West Dura，30分钟内发光效果可达SuperSignal West Dura的约1.8-3.6倍，BalbECL Star的4.2-6.9倍(参考图2)。


图1.BalbECL UT和Thermo公司SuperSignal West Dura及百奥莱博的BalbECL Star的Western blot的检测效果对比图。Western检测过程中仅发光试剂不同，其余完全相同。图中可见，百奥莱博的BalbECL Star的检测灵敏度大约为SuperSignal West Dura的50%左右，而BalbECL UT的检测灵敏度与SuperSignal West Dura相当或略佳。

BalbECL UT的发光强度高。20微升25pg/μl辣根过氧化物酶标记IgG中，加入100μL百奥莱博的BalbECL UT工作液等三种不同的发光液后，在不同时间点通过化学发光仪(luminometer)检测化学发光。检测数据显示在1小时内BalbECL UT的发光效果总是最强的，BalbECL Star和SuperSignal West Dura的发光比较稳定，但发光强度要弱不少(图2)。


图2.BalbECL UT和Thermo公司SuperSignal West Dura以及百奥莱博的BalbECL Star的检测效果对比。相同量的HRP-IgG(500pg)，与发光试剂混合后至图中指定时间检测化学发光。图中可见BalbECL UT在1小时内发光效果显著优于SuperSignal West Dura和BalbECL Star。

BalbECL UT的高灵敏度可以大大节省宝贵的样品以及非常昂贵的一抗和二抗的用量。同时必须注意适当减少一抗和二抗或样品的用量，以免获得过深的难以比较灰度的条带。

BalbECL UT非常稳定。BalbECL UT和BalbECL Star一样，37℃水浴孵育30天，和4℃保存的试剂相比，对相同样品的检测效果无任何明显差异。

BalbECL UT的背景很低，对PVDF膜和硝酸纤维素膜均适用。PVDF膜(YTB1201/YTB1202/YTB1204/YTB1205/YTB1206)和硝酸纤维素膜(YTB1203/YTB1207)可以向百奥莱博订购。

试剂盒组成：
 

组分	100mL	500mL
BalbECL UT A液	50mL	250mL
BalbECL UT B液	50mL	250mL

保存条件：
4℃避光保存，一年有效。37℃避光保存，一个月内有效。如果长期不用，可以-20℃避光保存，这样可以保存更长时间。

注意事项：
1．BalbECL UT A液和B液在吸取过程中必须要更换枪头，A液和B液相互污染后会导致A液或B液逐渐失效，影响后续的使用效果。
2．各溶液使用后，请盖紧瓶盖，以防失效。特别是B液，含有氧化剂，比较容易被还原而失效。
3．BalbECL UT的萤光持续时间很长，但开始反应后的20-30分钟内萤光更强一些，随后萤光会逐渐减弱，因此请注意充分利用这萤光较强的30分钟进行压片或成像。
5．当发现BalbECL UT的检测灵敏度过高而影响检测效果时，可以选择检测灵敏度较低一些的BalbECL Star(YT061)或BalbECL Plus(YT060)，或者减少样品、一抗或二抗的用量。
6．BalbECL UT A液和B液均对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
7．本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
8．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1．Western实验步骤可以参考百奥莱博的相关网页：http://www.bjbalb.com/article.aspx?dd=53
2．BalbECL UT工作液的配制：等体积混合适量BalbECL UT A液和B液，室温放置备用。工作液宜在临检测前配制。
3．Western二抗孵育后，并进行数次洗涤后，用WB专用镊子(YTB1301)将膜取出，用吸水纸略吸去过多的液体(切勿接触膜的蛋白面)，然后置于一洁净保鲜膜上。
4．根据膜的大小，按每10平方厘米膜加1mlBalbECL UT工作液的比例，滴加BalbECL UT工作液到膜上，确保使工作液均匀覆盖在膜上，放置1-2分钟。
5．取膜，弃BalbECL UT工作液，用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间，随后进行压片检测或化学发光成像仪检测。
6．压片检测：将膜固定于片夹内。暗室内压片1分钟，立即显影定影，根据结果再调整压片时间。或直接分别压片30秒、1、3、5分钟，然后一起显影定影观察结果。

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货号	名称	规格
YT067	Western封闭液(WB封闭液)	100ml
YT104	Alexa Fluor 488抗兔免疫荧光染色试剂盒	>300次
YT889	YT?免疫组化染色二抗稀释液	100ml
ZN1886	生物素标记的蛋白质分子量标准	20-40次
ZN1912	封闭蛋白PBS缓冲系统封闭液	500ml
ZN1956	5%BSA封闭液	12ml
ZN1958	免疫组化笔	1支

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名称：TMB显色液(组化或膜HRP显色用)
货号：YT077
规格：100ml
本试剂盒是一种采用了最新单一溶液TMB显色技术，通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色，用于免疫组化、原位杂交或膜显色等的显色液。本显色液也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。

通常的TMB显色试剂由多个组份组成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致结果不太稳定。本TMB显色液采用了最新的TMB显色技术，把所有的相关试剂全部配制在一个溶液中，仅由单一溶液组成，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。

TMB，即3，3′，5，5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。

本试剂盒主要适用于免疫组化或原位杂交时HRP的显色检测，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜显色检测。

用于免疫组化检测时，如果每个样品的显色液用量为0.1ml，则可以检测1000个样品；对于膜的显色检测，如果每次使用2.5ml显色液，则可以检测40次。

注意事项：
1. TMB对人体有刺激性，请注意适当防护。
2. 如果发现TMB辣根过氧化物酶显色液出现混浊或颜色变成蓝色，应该停止使用。

储存条件：4℃，避光，有效期一年。

名称：小鼠免疫组化(IHC)检测试剂盒
货号：SY0769
规格：150T
本试剂盒可用于检测以小鼠单克隆或多克隆抗体为一抗的免疫组化实验，检测原理基于高特异性高亲和力的链霉亲和素-生物素结合：已固定或培养细胞的抗原与一抗形成抗原抗体复合物，生物素化二抗特异性结合上述复合物，经辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素特异性识别生物素（即抗原所在位置），最后经辣根过氧化物酶底物显色即可检测相应抗原。

本品可适用于多种类型样本，如石蜡包埋切片、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本等。

产品组份：

封闭液————————————7.5ml
生物素标记抗小鼠二抗————7.5ml
HRP 标记链霉亲和素————7.5ml
20×DAB底物缓冲液————400µl
20×H2O2浓缩液————400µl
20×DAB浓缩液————400µl

使用方法

1 样品准备
染色前用PBS浸泡组织或细胞涂片10min。石蜡切片于室温下用二甲苯常规脱蜡、入水、抗原修复。
【注】：从此步骤起，严禁标本或组织切片干燥。

2 染色（以石蜡切片为例）
1）将处理好的石蜡切片放入3% H2O2-甲醇溶液中浸泡10min，以消除内源性过氧化氢酶的作用。
2）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
3）封闭：加一滴封闭液于组织切片上（需完全覆盖待检组织）孵育10min。
4）倒掉或吸干液体（不要冲洗）。
5）一抗：每张切片加2滴（100μl）或适量一抗（需完全覆盖待检组织），湿盒内孵育30-60min。
6）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
7）二抗：每张切片加一滴生物素标记抗小鼠二抗（需完全覆盖待检组织），孵育10min。
8）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
9）酶孵育：每张切片加一滴HRP标记链霉亲和素（需完全覆盖待检组织），孵育10分钟。
10）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
11）制备DAB显色液。
按照【20×DAB浓缩液：20×H2O2浓缩液：20×DAB底物缓冲液：水=1:1:1:20】的比例进行配制显色液，以1张切片为例，分别吸取上述3种溶液各2.5µl溶于50µl去离子水中，充分混匀即可。
【注】：
① DAB显色液需现配现用，避光放置，且在30min内使用。
② 可根据需要一次染多张切片，各种试剂量按照上述比例放大即可。
12）显色：向切片上滴加一滴上述DAB显色液，室温显色2-5min（此步可在显微镜下控制显色程度）。
13）自来水充分冲洗。
14）用合适复染剂复染，盐酸酒精分化。
15）继续后续脱水、透明、封片、镜检。

3结果判定：阳性结果处显处染棕黄或棕褐色。

储存条件：4℃，勿冷冻，有效期一年。

北京百奥莱博科技有限公司一家专注于生命科学研究领域的生物技术公司，坚持“质量至上，服务为本，全心全意助力生命科学”的理念，为广大用于提供稳定、可靠、专业的产品和服务支持，产品线包括分子生物学，细胞生物学，免疫检测，抗体，重组蛋白，血液制品等系列。“忙忙碌碌的平凡，铸就事业的不凡”。让我们携起手来，共同创造生命科学的蓬勃发展。