快速质粒小提试剂盒(10min提取)

特别提示：包括快速质粒小提试剂盒(10min提取)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：快速质粒小提试剂盒(10min提取)
英文名称：QuickPure Plasmid Mini kit
产品货号：WE0419
产品规格：200次

本试剂盒最大特点：简单快速、提取量高。整个提取过程不超过10分钟，不需要离心收集细菌和重悬菌体，直接在培养好的菌液中加入独特的超强裂解液Buffer L2，随后中和、离心过柱，提取出的质粒可高达30μg，并最大限度去除蛋白质、基因组等其它杂质。提取出的质粒DNA可直接用于细菌转化、酶切、PCR、体外转录、测序等其它下游实验。
试剂盒组成：
 

组份	200次
Buffer L2	25mL
Buffer N3	80mL
Buffer PB	35mL
Buffer PW(浓缩液)	25mL
Buffer EB	30mL
RNase A(10mg/ml)	800μL
吸附柱DM及收集管	200套

保存条件：RT

自备试剂：
无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项：
1、本试剂盒可在干燥、室温(15-30℃)环境下保存1年，如需保存更长时间可将离心柱置于2-8℃。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer N3中，混匀，置于2–8℃保存。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前若Buffer L2有沉淀，请置于37℃水浴中不断混匀直至溶液变澄清方可使用。
操作步骤：
1、取600μL细菌培养液到1.5ml离心管(自备)中。
2、向上述离心管中加入100μL Buffer L2，温和地上下颠倒溶液8次，溶液应由浑浊变为澄清的紫色，表明裂解完全。裂解时间不应超过2分钟。
3、向上述离心管中加入350μL Buffer N3(请先检查是否已加入RNaseA)，立即上下颠倒约8-10次充分混匀，此时溶液应完全变为黄色并有黄色沉淀形成。13,000rpm离心2-3分钟。
4、将步骤3中所得上清液缓慢倒入已备好的吸附柱(吸附柱DM及收集管)中，避免沉淀进入吸附柱。
5、13,000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入150μL Buffer PB,13,000rpm离心15秒。
7、向吸附柱中加入400μL Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),13,000rpm离心1分钟。
8、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附膜的中间部位加入30-100μL Buffer EB,13,000rpm离心1分钟，收集质粒DNA,-20℃长期保存。
当提取菌液量＞600μL时，可用如下操作步骤：
1、本试剂盒提取菌液可多至3ml，若提取的菌液量＞600μL时，需先将超出600μL的菌液13,000rpm离心30秒(收集菌体)，弃上清后再加入600μL菌液，将管底的菌体彻底重悬后接下面操作。
2、向上述离心管中加入100μL Buffer L2，温和地上下颠倒溶液10次，若溶液不澄清，需继续颠倒混匀，直至溶液变为澄清的紫色，裂解时间不应超过2分钟。(若溶液仍有浑浊现象说明菌体量过大，需适量减少菌体量。)
3、向上述离心管中加入350μL Buffer N3(请先检查是否已加入RNaseA)，立即上下颠倒充分混匀，直至紫色溶液完全变为黄色并有黄色沉淀形成，方可进行下一步操作。13,000rpm离心5分钟。
4、将上清转移到新的离心管中，加入200μL异丙醇，上下颠倒混匀数次，混匀后转入吸附柱(吸附柱DM及收集管)中，由于溶液量过大，此时需分两次过柱离心,13,000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入150μL Buffer PB,13,000rpm离心15秒。
6、向吸附柱中加入400μL Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),13,000rpm离心1分钟。
7、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附膜的中间部位加入50-200μL Buffer EB，室温放置2分钟,13,000rpm离心1分钟，收集质粒DNA,-20℃长期保存。

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