2×Es Taq MasterMix

特别提示：包括2×Es Taq MasterMix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×Es Taq MasterMix
英文名称：2×Es Taq MasterMix
产品货号：WE0417
产品规格：5ml|25ml

本品是由Es Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良性能。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，超过98%的PCR扩增能一次成功，同时复杂模板也能得到有效扩增，并可最大限度地减少人为误差和污染。本品不含染料，PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的大部分PCR产物3′端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。
产品组成：
 

组份	1mL	5mL
2×Es Taq MasterMix	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

【注】：
● 2×Es Taq MasterMix含有Es Taq DNA Polymerase，3mM MgCl2和400μM each dNTP。

保存条件：-20℃

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
 

试剂	50μL反应体系	终浓度
2×Es Taq MasterMix	25μL	1×
Forward Primer，10μM	2μL	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μL	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μL
ddH2O	up to 50μL

【注】：
● 引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2min
变性	94℃	30 s	25-35个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2min

【注】：
● 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
● 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Es Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
● 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

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