phi29 DNA聚合酶2.0

特别提示：包括phi29 DNA聚合酶2.0在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：phi29 DNA聚合酶2.0
英文名称：phi29 DNA Polymerase 2.0
产品货号：MT0027P
产品规格：500U|10000U

phi29 DNA聚合酶2.0(CAT#MT0027P)是phi29 DNA聚合酶（CAT#MT0027）的改造体，并经多次纯化分离而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的链置换、连续合成特性（>70kb）的基础上，提高了滚环扩增的反应温度，phi29 DNA聚合酶2.0可以在42℃条件下持续的进行DNA合成（而phi29 DNA聚合酶在此温度下反应活性很低）。

phi29 DNA聚合酶（CAT#MT0027）是从嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillus subtilis噬菌体phi29中克隆出的嗜温（30℃）DNA聚合酶，它具有特殊的链置换和连续合成特性，可连续合成长达70kb的DNA片段。

相比于phi29 DNA聚合酶（CAT#MT0027），phi29 DNA聚合酶2.0(CAT#MT0027P)具有以下优势：
 

• 在NGS测序中，其提升了高GC含量、回文结构等复杂模板的延伸能力，使得NGS的覆盖度更均一，降低测序所需深度；
• 高温的反应条件，提升了WGA产物的合成量（2-5倍），并缩短扩增时间（1~2h完成建库扩增）；
• 降低测序中Gap区域，提升单细胞测序的数据质量和完整度；
• 降低非特异性扩增产物；
• 提升MDA/RCA等实验的扩增性能和特异性。

此外，该酶仍然具有很强的3’→5’外切酶校读功能，合成的DNA片段保真性高。该酶的外切酶活性较强，因此合成过程中引物需要3’端硫代修饰，以降低外切活性对引物的切割效应。

产品特点：
 

• 超强链置换能力
• 连续合成能力
• 扩增的高保真性

产品应用：
 

• DNA恒温滚环扩增
• 需强链置换和DNA连续合成的反应
• 质粒快速复制
• 高保真快速复制

产品组成：
 

组分	500U	10000U
phi29 2.0 DNA Polymerase (10U/μl)	50μL	1mL
10×phi29 Buffer	1mL	1mL×10

储存：-20℃可保存3年。

单位定义：
一个活力单位即在42℃条件下，10分钟内催化0.5pmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

注意事项：
 

• 1×phi29 Buffer：50mM Tris-HCl pH7.5，10mM MgCl₂，10mM (NH₄)₂S0₄，4mM DTT。必要时可单独额外添加终浓度1mM DTT和0.2mg/ml BSA，可提高反应效率。
• 该酶的最佳反应温度为42℃ （在30~42℃。均有活性）。
• 65℃ 10min即可使该酶失活。
• 根据实验类型需要，调整dNTP的浓度100~500μM。
• 添加Yeast Pyrophosphatase（CAT#:MT0098）可提高DNA产量。
• 反应引物3’端的硫代修饰可避免引物降解。

应用实例：
用硫代修饰的6N随机引物和两种phi29 DNA聚合酶分别在30℃和42℃对不同量的pUC57质粒进行扩增，结果如下图；由图可见，phi29 2.0 DNA聚合酶在42℃条件下2h即可完成扩增，且产量相对较高。


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