特别提示:包括RNA/DNA SYBR LAMP MasterMix在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:RNA/DNA SYBR LAMP MasterMix
英文名称:2×RNA/DNA SYBR LAMP Mix
产品货号:MT2403
产品规格:20μL×100T
本制品对DNA或RNA样本均可进行变色LAMP扩增。该制品中包含Bst DNA聚合酶4.0,可高效的完成LAMP及RT-LAMP扩增反应,无需再添加任何其它试剂。优化的反应体系,确保快速的检测试剂盒开发工作。
SYBR Green系列产品为荧光LAMP的专用试剂,可配套荧光定量PCR仪,或恒温荧光检测仪使用。SYBR Green的激发波长为480nm,检测波长为520nm。可在SYBR Green通道或FAM通道检测荧光信号,适用于高通量或低通量的快速LAMP荧光检测。
LAMP是一种新型的滚环扩增技术,在恒温条件下,呈指数级别放大核酸分子,30分钟内将DNA放大10
9~10
10倍。其快速、恒温的独特技术优势,使得LAMP技术成为开发诊断试剂的明星潜力技术。由于在LAMP扩增中用到很高浓度的引物,因此难免保证有少量错配和引物Dimer,这些轻微的污染都会导致LAMP高速的扩增中造成假阳性检测。我公司依托出色的阴性控制技术建立了全新的LAMP检测平台。
产品组成:
组分 |
规格 |
2×RNA/DNA SYBR LAMP MasterMix |
1ml |
保存条件:-20℃,保存2年。
使用方法:
- 配制反应体系
在0.2ml EP反应管中加入下述试剂
成分 |
用量 |
2×RNA/DNA SYBR LAMP MasterMix |
10μl |
10×LAMP Primer Mix |
2μl |
模板RNA/DNA |
X μl |
ddH2O |
至20μl |
10×LAMP Primer Mix浓度:FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为4μM、F3/B3分别为2μM
- 反应设置
反应体系配好后,置于荧光定量PCR仪中于60~68℃(首次实验采用65℃)进行反应20~45min。1min收集一次荧光信号。
- 观察结果
读取扩增曲线进行阴性和阳性判读。
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名称:PCR级绿如蓝DNA染料
货号:BTN70909
规格:0.1mL
第二代的非饱和型荧光染料(如SYBR Green I)在高浓度下会抑制荧光PCR,所以反应重复性很不稳定,并且不能用于要求严格的Tm分析。本产品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一样,是第三代饱和型荧光染料,在饱和浓度下也不抑制荧光PCR反应。
产品特点:
1. 饱和浓度不抑制PCR反应,因此得到的荧光信号更强。
2. 抗水解、抗热解和抗光解的能力强于目前最常用的SYBR Green I。
3. 饱和浓度下染料分子没有机会在DNA分子间发生移位,因此荧光强度跟DNA变性程度呈线性关系,可以用于精细的Tm 测定实验,如High-resolution melting curve analysis等。
4.跟目前常用的PCR 仪器(包括iCycler、LightCycler、ABI 测序仪)兼容。激发和发射光谱跟FAM和SYBR Green I 接近,可以使用SYBR Green I的光学设置参数。
5. 不能渗透进入细胞内,毒性和致突变性远低于SYBR Green I。
6.可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲线分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛细管电泳等研究。
储存条件:常温运输、-20℃避光保存,有效期一年。
使用方法:
先将本产品放置在室温融化,然后震荡10秒钟,短暂离心后待用。下面以50μL的标准PCR反应体系为例说明其使用:
1.在一干净的PCR 管中,加入下列成分:
试剂 |
加入量 |
10×PCR Buffer(No Mg2+) |
5μl |
MgCl2 50mM |
2.5μl |
dNTP 10mM |
1μl |
本产品(PCR级绿如蓝染料) |
2.5μl |
Taq DNA聚合酶 |
1-5U |
DNA模板 |
适量 |
PCR引物 |
5-50 pmol each |
补水到 |
50μl |
2. 放入荧光PCR 仪中进行qPCR,并在退火或延长反应时记录荧光信号。使用的光学参数可以跟FAM或SYBR Green I 完全一样。
注意事项:
1. 如果使用iCycler,可以不加FAM;如果使用ABI系统,需要在Well Inspector选项下的非特异参照中选择“无”;使用LightCycler时,最好在PCR 体系中再加入终浓度为0.5mg/mL的BSA以降低仪器对染料和模板的非特异吸附。
2. 如果使用化学修饰过的Taq DNA聚合酶,可能需要减低KCl的浓度并提高Tris的浓度。
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