全长Bst DNA聚合酶

特别提示：包括全长Bst DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：全长Bst DNA聚合酶
英文名称：Bst DNA Polymerase, Full Length
产品货号：JN3013
产品规格：250U|250U×5

Bst DNA聚合酶来源于Bacillus stearothermophilus，具有5"→3" DNA聚合酶活性和双链特异的5"→3"核酸外切酶活性，但缺失3"→5"核酸外切酶活性。本制品利用基因重组技术，将全长Bst DNA聚合酶在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。该酶应用于DNA测序，模板可低至纳克级别。

产品用途：
 

• 富含GC序列的DNA序列测定；
• 微量（纳克量）DNA模板的快速测序等。

注意事项：
 

• Bst DNA聚合酶不具有3′→5′外切酶活性。
• 长期贮存需加入100μg/ml BSA或0.1%Triton X-100。
• 建议反应温度不要超过70℃。
• 不能用于热循环测序或PCR。

产品组成：
 

组分	250U
全长Bst DNA聚合酶	50μL
10×反应缓冲液	200μL

质量保证：
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，qPCR方法检测无大肠杆菌DN A残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：
在65℃条件下，30分钟内使1nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

10×反应缓冲液：
200mM Tris-HCl，100mM(NH₄)₂SO₄，500mM KCl，20mM MgSO₄，1% Tween 20，pH8.8储存于25℃。

贮存液：
50mM KCl，10mM Tris-HCl (pH7.5)，1mM DTT,0.1mM EDTA，0.1% Triton X-100和50% Glycerol。

反应条件：
1×反应缓冲液，65℃温浴。

热失活：
80℃，20分钟

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名称：DNA末端平滑试剂盒
货号：YT404
规格：20次
本试剂盒可以进行20个常规的末端平滑化反应。本品是利用T4 DNA聚合酶(T4 DNA Polymerase)的5"→3"DNA聚合酶活性和3"→5"的DNA外切酶活性，用于将酶切或PCR等反应后产生的粘末端转变为平末端的试剂盒。经过本试剂盒处理产生的平末端DNA片段可以用于常规的平端连接反应。

粘末端有两种，一种为5"端突出末端，另外一种为3"端突出末端。本试剂盒可以将5"端突出末端补平，也可以将3"端突出末端削平(也称打平)。

当末端为5"端突出末端时，T4 DNA Polymerase可以利用其5"→3"DNA聚合酶活性将末端补平；当末端为3"端突出末端时，T4 DNA Polymerase可以利用其3"→5"DNA外切酶活性将末端削平。

产品组份：
T4 DNA Polymerase(1U/μl)————20μl
Reaction Buffer(5X)———————100μl
dNTP Mixture(2.5mM each)—————50μl

Reaction Buffer(5X)：335mM Tris-HCl(pH8.8 at 25℃)，33mM MgCl2，5mM DTT， 84mM(NH4)2SO4。

储存条件：-20℃

名称：T4 DNA连接酶
货号：WE0239
规格：100U|500U
  T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。

产品组成：
 

组份	100U	500U
T4 DNA Ligase，5 U/μl	20μl	100μl
10×Ligation Buffer	150μl	750μl
50%PEG Solution	150μl	750μl

实验前准备及重要注意事项
1、T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2、PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率，建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。

使用方法：

一、粘性末端的连接：

1、按以下体系配制反应液：
 

组份	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	0.2μl	1 U
ddH2O	补充至20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育10分钟。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

二、平末端的连接：

1．反应体系：
 

组分	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
50%PEG Solution	2μl	5%
ddH2O	补充至20μl	20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

三、线性DNA的自身环化：

1、反应体系：
 

组分	50μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	5-50ng
10×Ligation Buffer	5μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
ddH2O	补充至50μl	50μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：粘性末端22℃孵育10分钟；平末端22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

储存条件：-20℃。

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SV0300 DdeI限制性内切酶 5KU|1KU|500U

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