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T5 Direct PCR kit（Blood）
【产品简介】
本产品是一款专为血液样品直接扩增设计的试剂盒，适用于新鲜血液、4°C贮存血液、冷冻血液以及储存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血渍等多种血样，且兼容所有常规抗凝剂（EDTA、柠檬酸盐、肝素等），可以全血为模板扩增长达8 kb的基因组片段。产品中所含的T5 Blood DNA Polymerase是在T5 DNA Polymerase基础上改造而来，具有优良耐受血液样品中抑制剂的能力，特殊的DNA-Binding结构Sso7d蛋白结构域的融合使其具有超快的延伸速度，同时基于lacZα法测试，该酶的保真度为野生型Taq DNA聚合酶的20倍。
本产品为2×浓度的PCR直扩预混液，已包含合适浓度的Mg2+、DNA聚合酶和dNTPs，使用时只需添加模板和引物，并补水至1×浓度即可进行反应。使用本试剂盒扩增的产物为平末端，纯化后可用于后续克隆（推荐T载体目录号∶TSV-007B）、酶切、测序及文库构建等实验。
【产品特点】
无需提取基因组DNA，操作简便，省时省力；
改造的T5 Blood DNA Polymerase，具有极高的抑制物耐受度，保真度为野生型Taq DNA聚合酶的20倍；
快速扩增，延伸速度高达10 s/kb；
适用于各种血液样本，兼容常规抗凝剂。
【产品应用】
适用于新鲜血液、4°C贮存血液、冷冻血液以及储存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血渍等多种血样的直接扩增。
【产品组成及保存】
-25~-15℃保质期2年
| 组分 | 规格 |
| 2×T5 Direct PCR kit（Blood） | 5×1.0 mL |
| MgSO4(50 mM) | 1×1.0 mL |
| Lysis Buffer | 2×10 mL |
| Positive Control Primer Mix（Sox21）（10 μM each） | 100 μL |
【操作流程】
反应体系
| 50 µL 体系 | |
| 2×T5 Direct PCR kit（Blood） | 25 µL |
| 10 μM Primer F | 2 µL |
| 10 μM Primer R | 2 µL |
| Template DNA | 1~5 µL |
| ddH2O | Up to 50 µL |
反应程序
| 温度 | 时间 | 循环次数 | ||
| 1 | 预变性 | 98 ℃ | 3 min | 1 cycle |
2 |
变性 | 98 ℃ | 10 s | 30~40 cycles |
| 退火 | Tm+3 ℃ | 5~10 s | ||
| 延伸 | 72 ℃ | 10 s/kb | ||
| 3 | 终延伸 | 72 ℃ | 3~5 min | 1 cycle |
【实例分享】
分别取 1 µL 血液样品和唾液样品使用T5 Direct PCR kit（Blood），用 6 对不同引物进行扩增，产物大小分别为 800 bp、1604 bp、2406 bp、887 bp、1700 bp、2532 bp。均扩增出特异目的产物。
【问题讨论】
Q1：2×T5 Direct PCR Mix（Blood）中的MgSO4 （50 mM） 如何使用？
A1：在 2×T5 Direct PCR Mix（Blood）中已包含终浓度为2.5 mM的MgSO4。另外配备的MgSO4 （50 mM）用于调整反应体系中镁离子浓度，如需要调整，宜以0.2 mM 的梯度增加，以找到最佳反应浓度。镁离子也可以螯合血液样品中的抗凝剂EDTA，但高浓度的镁离子会增强非特异扩增，且会降低聚合酶的保真度。
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