PCR lite 第三代数字PCR系统

【实验结果】

 

 

图 2. 新型冠状病毒（COVID-19）多重数字 PCR 定量检测结果。

（1）A 中 FAM 通道 的 1D 散点图阳性点为蓝色（上：N+RNase；中：N；下：RNase），阴性点为黑色；A中 Cy5 通道的 1D 散点图阳性点为红色（上：orf1ab +RNase；中：orf1ab；下：RNase），阴性点为黑色；

（2）2D 散点图（各点簇代表基因：1.orf1ab; 2.RNase; 3.N; 4.orf1ab+RNase; 5.orf1ab+N; 6. N+RNase; 7. orf1ab+N+ RNase）。

 

图 3. 浓度稀释测定曲线。orf1ab 和 N 基因样本由 1mL 假病毒样本（10⁷ copies/mL）提取得到，RNase 样本为健康人咽拭子 RNA 提取得到，各组实验中对 orf1ab 和 N 基因进行稀释，而 RNase 样本用量相同。

      本次测试以 orf1ab 和 N 的假病毒 RNA 提取液以及人类咽拭子 RNA 提取液为样本，模拟在临床中的实际情况。图 2 为数字 PCR 检测结果散点图，显示散 点分离效果明显。图 3 为浓度稀释测定曲线，针对 orf1ab 和 N 基因进行稀释，同时保持内参基因 RNase 的加入量不变。通过图 3 可以观察到，在稀释 10²-10⁵倍区间内（即在 1mL 样本量提取 RNA 的情况下，样本病毒浓度在 10²-10⁵copies/mL），orf1ab 和 N 基因测得浓度结果线性关系显著；同时对于内参基因测得浓度，多次测定结果的 CV 为 4.8%，无显著差异。因此，本检测的新冠病毒检测限为 10² copies/mL，线性检测范围为 10²-10⁵copies/mL。而同类 RT- qPCR 试剂盒，检测限一般为 10³ copies /mL，而且无定量检测能力，同时一般也缺乏内参进行控制。

检测结果展示了新型冠状病毒（COVID-19）多重数字 PCR 法检测试剂盒优秀的性能。1. 超敏的检测能力：更低的检测限可以更早检出病人，也可减少因病毒量过少而误判的阴性；2. 杰出的定量能力：无需借助标准曲线即可直接测得病毒浓度，对病程判断有重要作用；3. 准确的检测结果：一次检测多个基因，同时还引入内参，以发现因为样本处理原因而导致的假阴性结果。

      达普生物目前正在与医院推进临床案例研究，希望在多重数字 PCR 检测上建立一套可靠的检测方案，整合全自动化核酸提取设备、病毒核酸快速提取试剂、数字 PCR 仪、微流控芯片及检测试剂等，推出一整套解决方案。务求降低假阴性风险，提高检测的准确性，为传染性疾病的检测提供更加灵敏、准确的检测方法，为临床提供更多选择。

高明生物是一家专业仪器公司，为高校研究所、政府实验室、工厂等提供专业的细胞分析或者显微成像相关的设备及耗材。