B6-Nes-Cre

B6-Nes-Cre

品系名称：B6/JGpt-H11^{emCin(Nes-Cre)}/Gpt

品系类型：Knock-in

品系编号：T003763

背景：C57BL/6JGpt

 

 

品系描述

集萃药康采用基因编辑技术制作了在大鼠nestin启动子和增强子驱动的组织特异性表达Cre蛋白的B6-Nes-Cre小鼠模型，该模型可作为中枢及周围神经系统特异性诱导LoxP重组的Cre工具鼠。例如删除FLOX区域，即将该工具鼠与得到的条件性敲除模型小鼠配繁，可组织特异性删除两个LoxP之间的基因片段^[1-2]。

通过基因编辑技术定点整合至H11位点，而H11位点作为KI的插入位点具有显著的优势：1.转入的基因定点整合至染色体，故传代稳定，不会出现因传代导致表达丢失的现象；2.能避免基因组上毗邻序列的干扰效应；3. 外源基因插入到这个位置不会破坏任何内源性基因，并且小鼠生长发育正常、不影响小鼠表型及功能^[3]。

 

品系策略
 

应用领域

1.中枢及周围神经系统特异性诱导LoxP重组的Cre工具鼠

 
验证数据

1.Cre特异性表达检测

检测方法：使用Nes-Cre鼠配繁rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠。rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠表达红色荧光，当与表达Cre重组酶的小鼠交配，后代在表达Cre的细胞中tdTtomato缺失，则表达绿色荧光。通过冰冻切片观察，可观察到绿色荧光表达情况，从而确认Cre蛋白在小鼠各组织的表达情况。

观察结果：观察组织冰冻切片，可见rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Nes-Cre交配后代小鼠，脑、脊髓、心、肺、胰腺中tdTomato等原件被切除，可表达绿色荧光EGFP，其他不能表达Cre的细胞仍表达红色荧光。

 

 

 

 

图1 B6-Nes-Cre小鼠Cre蛋白在脑、脊髓、心、肺、胰腺的表达检测。Cre能够在这些检测的组织中表达，能够观察到绿色荧光。

备注：Cre-为rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠简写；Cre+为rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Nes-Cre交配后代小鼠简写。上图Cre-与Cre+ 小鼠均为15.0周雌鼠，200倍镜下荧光图片（Scale bar 50um）。

 

 

2.非特异性表达检测

观察结果：观察其他主要器官组织冰冻切片，可见rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Nes-cre交配后代，肝、脾、肾、肠、骨骼肌细胞中tdTomato等原件不被切除，不表达绿色荧光，仍表达红色荧光。

 

 

图2 B6-Nes-Cre小鼠Cre蛋白在肝、脾、肾、肠、骨骼肌的表达检测。Cre在这些检测的组织中不表达，观察不到绿色荧光。

 

备注：Cre-为rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠简写；Cre+为rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Nes-Cre交配后代小鼠简写。上图Cre-与Cre+ 小鼠均为15.0周雌鼠，200倍镜下荧光图片（Scale bar 50um）。

 

 

参考文献
1. L. Zimmerman, U. Lendahl,M. Cunningham et al., “Independent regulatory elements in the nestin gene direct transgene expression to neural stem cells or muscle precursors,” Neuron,vol. 12, no. 1, pp. 11–24, 1994
2. Dubois, Nicole C., et al. "Nestin‐Cre transgenic mouse line Nes‐Cre1 mediates highly efficient Cre/loxP mediated recombination in the nervous system, kidney, and somite‐derived tissues." genesis 44.8 (2006): 355-360.
3.Hippenmeyer, Simon, et al. "Genetic mosaic dissection of Lis1 and Ndel1 in neuronal migration." Neuron 68.4 (2010): 695-709.