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销售商： 杰克森医疗科技（上海）有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品简介：
携带 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2“基因敲入”的杂合小鼠，破坏了内源 Lgr5 基因功能，并表达了 EGFP 和 CreERT2 融合蛋白。当该品系与含 loxP 侧翼序列的小鼠杂交后，他莫昔芬诱导的 Cre 介导的重组导致后代中表达 Lgr5 的细胞中 loxP 位点间的基因序列的敲除。该品系可用于谱系追踪或标记表达 Lgr5 的小肠干细胞
相关应用：
CreERT; 他莫昔芬（tamoxifen）; loxP ;小肠（small intestine）
系统命名：B6.129P2-Lgr5tm1(cre/ERT2)Cle/J
普通命名：Lgr5-EGFP-IRES-creERT2
品系货号：008875 <<<点此进入官网浏览详情
品系来源：该品系由Hubrecht Institute的Hans Clevers 博士捐赠。
原始参考文献为 Barker N; van Es JH; Kuipers J; Kujala P; van den Born M; Cozijnsen M; Haegebarth A; Korving J; Begthel H; Peters PJ; Clevers H. 2007. Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5. Nature 449(7165):1003-7 PubMed: 17934449 MGI: J:12712
品系描述：
虽然纯合小鼠不能存活，但是 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2 杂合小鼠可存活且可繁育；携带 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2“基因敲入”等位基因，破坏了内源 Lgr5 (Gpr49) 基因功能，并表达了来自 Lgr5 启动子/增强子驱动的 EGFP 和 CreERT2 融合蛋白。在小肠隐窝基底柱状细胞（也称为小肠干细胞）和结肠中观察到 EGFP 荧光。Cre-ERT2 融合基因活性可诱导；仅在给予他莫昔芬后的相同细胞中观察到。也可在其他表达 Lgr5 的细胞类型（包括癌前小鼠腺瘤、结肠癌细胞、胃腺上皮干细胞、乳腺基底上皮层干细胞和毛囊干细胞）中观察到 EGFP 或可诱导的 CreERT2 表达。
捐赠者报道了 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2 转基因在小肠和结肠中多样化的表达（在小肠发育早期表达的基因经常出现的情况）。这种多样化的表达有利于进行谱系追踪和小肠干细胞分离，但对于更多的定量研究如 Lgr5-Cre 驱动的基因敲除策略可能存在局限性。
Cre-ERT2 融合蛋白由 Cre 重组酶和三重突变形式的人雌激素受体组成，在生理浓度下，其不与其天然配体（17β-雌二醇）结合，但会与合成的雌激素受体配体 4-羟基他莫昔芬（OHT 或他莫昔芬）和ICI 182780 （敏感性较低）结合。Cre-ERT2 限于细胞质，只能在暴露于他莫昔芬后进入细胞核内。为对抗他莫昔芬注射引起的雌激素激动剂混合效应（可导致妊娠小鼠晚期流产），可同时给予黄体酮。因此，当 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠与携带 loxP 侧翼序列的小鼠杂交时，他莫昔芬诱导的 Cre 介导的重组导致后代中表达 Lgr5 的细胞中 loxP 位点间的基因序列的敲除。
品系建立：
EGFP-IRES-creERT2 载体设计时，将增强绿色荧光蛋白序列 (EGFP)、内部核糖体进入位点 (IRES)、CreERT2 融合基因（Cre-ERT2；融合至人雌激素受体配体结合域三重突变 G400V/M543A/L544A 的 Cre 重组酶）、polyA 信号和 loxP 侧翼的 neo 盒插入靶基因的第一个 ATG 密码子。通过电穿孔将此载体插入源自雄性 129P2/OlaHsd 的 IB10/E14IB10 胚胎干 (ES) 细胞中的靶基因内。将正确靶向的 ES 细胞注射到受体囊胚中，并将嵌合雄鼠与 C57BL/6 雌鼠杂交。然后将突变小鼠与 EIIa-cre 小鼠（C57BL/6 遗传背景，见品系货号 003724 https://www.jax.org/strain/003724 ）杂交，以去除 neo 选择盒。捐赠者报告，将获得的 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠（去除 floxed-neo）回交至 C57BL/6J（见下文的 SNP 说明）至少 4 代。接下来，将 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠与 Rosa26-lacZ 小鼠（C57BL/6 遗传背景，见品系货号 003474 https://www.jax.org/strain/003474 ）杂交。将具有两种突变的小鼠进一步回交超过 6 代。在到达杰克森实验室后，将小鼠与 C57BL/6J 近交小鼠（品系货号 000664 https://www.jax.org/strain/000664 ）杂交至少一代以建立种群。将小鼠选择性杂交以去除 Rosa26-lacZ 等位基因。
JAX小鼠资源库拥有近800种Cre小鼠品系，其中部分Cre表达鉴定结果可参考以下链接：
https://www.jax.org/research-and-faculty/resources/cre-repository/characterized-cre-lines-jax-cre-resource
携带 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2“基因敲入”的杂合小鼠，破坏了内源 Lgr5 基因功能，并表达了 EGFP 和 CreERT2 融合蛋白。当该品系与含 loxP 侧翼序列的小鼠杂交后，他莫昔芬诱导的 Cre 介导的重组导致后代中表达 Lgr5 的细胞中 loxP 位点间的基因序列的敲除。该品系可用于谱系追踪或标记表达 Lgr5 的小肠干细胞
相关应用：
CreERT; 他莫昔芬（tamoxifen）; loxP ;小肠（small intestine）
系统命名：B6.129P2-Lgr5tm1(cre/ERT2)Cle/J
普通命名：Lgr5-EGFP-IRES-creERT2
品系货号：008875 <<<点此进入官网浏览详情
品系来源：该品系由Hubrecht Institute的Hans Clevers 博士捐赠。
原始参考文献为 Barker N; van Es JH; Kuipers J; Kujala P; van den Born M; Cozijnsen M; Haegebarth A; Korving J; Begthel H; Peters PJ; Clevers H. 2007. Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5. Nature 449(7165):1003-7 PubMed: 17934449 MGI: J:12712
品系描述：
虽然纯合小鼠不能存活，但是 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2 杂合小鼠可存活且可繁育；携带 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2“基因敲入”等位基因，破坏了内源 Lgr5 (Gpr49) 基因功能，并表达了来自 Lgr5 启动子/增强子驱动的 EGFP 和 CreERT2 融合蛋白。在小肠隐窝基底柱状细胞（也称为小肠干细胞）和结肠中观察到 EGFP 荧光。Cre-ERT2 融合基因活性可诱导；仅在给予他莫昔芬后的相同细胞中观察到。也可在其他表达 Lgr5 的细胞类型（包括癌前小鼠腺瘤、结肠癌细胞、胃腺上皮干细胞、乳腺基底上皮层干细胞和毛囊干细胞）中观察到 EGFP 或可诱导的 CreERT2 表达。
捐赠者报道了 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2 转基因在小肠和结肠中多样化的表达（在小肠发育早期表达的基因经常出现的情况）。这种多样化的表达有利于进行谱系追踪和小肠干细胞分离，但对于更多的定量研究如 Lgr5-Cre 驱动的基因敲除策略可能存在局限性。
Cre-ERT2 融合蛋白由 Cre 重组酶和三重突变形式的人雌激素受体组成，在生理浓度下，其不与其天然配体（17β-雌二醇）结合，但会与合成的雌激素受体配体 4-羟基他莫昔芬（OHT 或他莫昔芬）和ICI 182780 （敏感性较低）结合。Cre-ERT2 限于细胞质，只能在暴露于他莫昔芬后进入细胞核内。为对抗他莫昔芬注射引起的雌激素激动剂混合效应（可导致妊娠小鼠晚期流产），可同时给予黄体酮。因此，当 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠与携带 loxP 侧翼序列的小鼠杂交时，他莫昔芬诱导的 Cre 介导的重组导致后代中表达 Lgr5 的细胞中 loxP 位点间的基因序列的敲除。
品系建立：
EGFP-IRES-creERT2 载体设计时，将增强绿色荧光蛋白序列 (EGFP)、内部核糖体进入位点 (IRES)、CreERT2 融合基因（Cre-ERT2；融合至人雌激素受体配体结合域三重突变 G400V/M543A/L544A 的 Cre 重组酶）、polyA 信号和 loxP 侧翼的 neo 盒插入靶基因的第一个 ATG 密码子。通过电穿孔将此载体插入源自雄性 129P2/OlaHsd 的 IB10/E14IB10 胚胎干 (ES) 细胞中的靶基因内。将正确靶向的 ES 细胞注射到受体囊胚中，并将嵌合雄鼠与 C57BL/6 雌鼠杂交。然后将突变小鼠与 EIIa-cre 小鼠（C57BL/6 遗传背景，见品系货号 003724 https://www.jax.org/strain/003724 ）杂交，以去除 neo 选择盒。捐赠者报告，将获得的 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠（去除 floxed-neo）回交至 C57BL/6J（见下文的 SNP 说明）至少 4 代。接下来，将 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠与 Rosa26-lacZ 小鼠（C57BL/6 遗传背景，见品系货号 003474 https://www.jax.org/strain/003474 ）杂交。将具有两种突变的小鼠进一步回交超过 6 代。在到达杰克森实验室后，将小鼠与 C57BL/6J 近交小鼠（品系货号 000664 https://www.jax.org/strain/000664 ）杂交至少一代以建立种群。将小鼠选择性杂交以去除 Rosa26-lacZ 等位基因。
JAX小鼠资源库拥有近800种Cre小鼠品系，其中部分Cre表达鉴定结果可参考以下链接：
https://www.jax.org/research-and-faculty/resources/cre-repository/characterized-cre-lines-jax-cre-resource
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