淋病奈瑟菌的形态特征与保藏条件及注意事项

                                 淋病奈瑟菌的形态特征与保藏条件及注意事项！​
 
 北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。

淋病奈瑟菌形态与脑膜炎球菌相似。革兰染色阴性，圆形或卵圆形，直径约为0.8μm。常呈双排列，菌体相接触面略凹陷，形似一对咖啡豆。急性淋病患者标本涂片镜下观察时，淋病奈瑟菌多存在于中性粒细胞内，慢性淋病时则多在细胞外。淋病奈瑟菌无鞭毛，但有菌毛，不形成芽胞，分离初期有荚膜。 

一、菌种简介
平台编号：bio-67921
拉丁属名：Neisseria gonorrhoeae
菌株名称：淋病奈瑟菌
其它编号：ATCC 19424=NCTC 8375 
培养基编号：35 
培养温度：37℃, 5% CO2 
培养时间：48-72 小时 b
用途：质控菌株；BBL的质控菌株；性传播疾病的研究；Media testing  
培养基信息 
培养基编号：35 
名称：Blond Agar (血琼脂培养基) 
备注：Peptone (蛋白胨) 10g Glucose (葡萄糖) 2g NaCl 5g NaH2PO4 2.5gSodium citrate (柠檬酸钠) 5g Brain infusion (脑浸汁) 800mlPig heart infusion (猪心浸) 200ml Sleep Blood (羊血) 10%pH 7.2 [Note]：Preparation of pig brain and pig heart infusion：（1） Smash up 100g fresh pig heart （without fat and blood vessel）.Add distilled water up to 1000ml;（2） Cut 200g fresh pig brain (without blood vessel). Add distilled water up to 1000ml;（3） Keep the two infusions at 50℃ for 1 hr , then boil for 15 minutes;（4） Cool and filtrate through gauze . [注]猪心和猪脑浸汁法：（1）新鲜猪心除去心头和脂肪，搅碎100克加蒸馏水至1000毫升；（2）新鲜猪脑除去血管，取200克加蒸馏水至1000毫升；（3）50℃保温1小时，然后煮开15分钟；（4）冷却后用纱布过滤备用。 

二、培养基
TSA+5%脱纤维羊血（血琼脂平板）

三、形态特征
淋病奈瑟菌呈卵圆或豆状，常成双排列，邻近面扁平或稍凹，像两瓣黄豆对在一起，大小0.6μm×0.8μm。革兰氏染色阴性，呈粉红色，美蓝染色呈蓝色。急性炎症期细菌多在患者分泌物的少部分中性粒细胞的胞浆中，慢性期则多在细胞外，且有些可呈单个球形或四联状。人工培养后形态亦常呈球形、单个、成双或四联排列。
淋球菌较为娇嫩，最怕干燥，适宜在潮湿、温度为35～36℃、含2.5%～5.0%二氧化碳的条件下生长，其生长的最适pH为7.0～7.5。淋球菌有自溶现象，离开人体后，菌细胞可自行溶解，“自杀身亡”，即使不自溶也会在短时间内失去传染性。淋球菌对外界理化因素的抵抗力相当差，在完全干燥的环境中1～2h即死亡，但若附着于衣裤和被褥中，则能生存18～24h，在厚层脓液或湿润的物体上可存活数天。在50℃仅能存活5min。淋球菌对常用的黏膜杀菌剂抵抗力很弱。中科院微生所以常用的洁阴洗液作测试，淋球菌在洁阴洗液作用下1min内全部被杀灭，淋球菌对可溶性银盐也很敏感，1∶4000硝酸银溶液可使其在7min内死亡，使脓液中的淋球菌2min内死亡。1%苯酚（石炭酸）溶液能在3min内将其杀灭。除耐药菌株外，淋球菌对抗生素敏感，但抗生素的最小抑菌浓度逐渐有所提高。 
淋球菌培养要求高，一般不易培养，需在培养基中加入腹水或血液。它是嗜二氧化碳的需氧菌，在PH6.5-7.5，温度35-37℃，含5%-10%二氧化碳环境中生长迅速。抵抗力弱，不耐干燥和寒冷，42℃存活20分钟，50℃仅存活5分钟，100℃立即全部死亡，对一般消毒剂敏感，对磺胺、青霉素较敏感，但易产生耐药性。国内采用巧克力琼脂或血琼脂培养基，均含有抗生素，可选择地抑制许多其他细菌生长。在36℃，70%湿度，含5%-10%CO2（烛缸）环境中培养，24-48小时观察结果。培养后还需进行菌落形态，革兰氏染色，氧化酶试验和糖发酵试验等鉴定。

四、保藏条件
斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。 活化好的菌种保藏方法请查阅文献或咨询技术。 

五、注意事项
1) 首次活化，粉要全部用完，不能预留，用适量的培养液或无菌水溶解，接种在 1-2 个平板上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；
2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；
3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；
4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；
5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。
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北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。