RBITC标记的山羊抗小鼠IgM说明书单抗原理:
抗体主要由B淋巴细胞合成。每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成多克隆,并合成多种抗体。如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体,称为单克隆抗体。
基本信息:
单克隆抗体:
1.概念:由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体。
2.特点:化学性质单一,特异性强,灵敏度高。
3.单克隆抗体的应用:
(1)诊断疾病:诊断病毒引起的疾病和用癌细胞抗原制备的单克隆抗体定位诊断。
(2)药物导向治疗:运用药物与单克隆抗体连接在一起制成“生物导弹”
(3)分离和纯化抗原分子。
单抗的制备过程:
1.动物免疫:注射特定抗原蛋白
2.分离脾淋巴细胞:与培养好的骨髓瘤细胞混合,人工诱导细胞融合。
3.细胞融合:淋巴细胞杂交瘤的制备
4.杂交瘤细胞的筛选:HAT选择培养基筛选出杂交瘤细胞。(含次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)及胸腺嘧啶核苷(T)的一种培养基,其中三种成分与细胞DNA合成有关,骨髓瘤细胞遗传缺陷型,不能利用,被淘汰)
5.培养杂交瘤细胞:体外培养杂交瘤细胞,从培养液中分离提取单克隆抗体。或者,将杂交瘤细胞移植到小鼠腹腔内,从小鼠腹水中分离提取单克隆抗体。
6.单克隆抗体的制备和冻存、纯化
单抗制备过程:
1.提取合成专一性抗体的单个B淋巴细胞(不能在体外生长)。
2.应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,得到杂交瘤细胞。
3.对杂交瘤细胞进行细胞培养,选出所需要的细胞群,并进行克隆化培养,得到稳定的杂交瘤细胞,再进行大规模培养获得单克隆抗体。
4.提纯,一般常用金黄色葡萄球菌蛋白A-琼脂糖4B亲和层析法。
多抗和单抗特性比较:
(1)均一性。一种单抗中,每个抗体的化学结构和氨基酸顺序都相同,只有一种Ig亚类。多抗是多种种类和亚类Ig的混合物。
(2)稳定性。单抗对PH变化敏感,对热不稳定,提纯过程中易变性,而多抗的稳定性则较好。
(3)特异性。单抗是单一地针对抗原的某一决定簇,所以用它进行血清学反应时,特异性强,敏感性高,一般不发生交叉反应。而多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合,所以特异性较差,较易引起交叉反应。
(4)重复性。单抗的重复性好,而多抗每批都不一样。
(5)沉淀反应。多抗由于与抗原多价结合容易形成网络样沉淀,而单抗只与抗原结合产生二聚体,不能直接形成抗原抗体沉淀物。大鼠激活素A(ACVA)ELISA试剂盒 ,英文名: ACVA ELISA Kit
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