犬源性成分(Canine)核酸检测试剂盒

产品名称：犬源性成分(Canine)核酸检测试剂盒
产品分类：荧光-PCR法
产品编号：BH11848P
产品规格：48T/盒
本试剂盒不但准确、快速、灵敏，还具有以下特点：
1.  即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单。
2.  预期的 PCR 产物长度为 494 bp。
3.  本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

规格及成分
即用型指标Mix 3.0（1.5 mL）
专一性引物对    （100 μL）
阳性对照        （50 μL）    
超纯水          （1 mL）
说明书：         1 份
运输保存：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
犬源性成分(Canine)核酸检测试剂盒使用方法    
1 实验所需器材与试剂
1.1 器材
1）PCR仪
2）PCR反应管
3）电泳仪及水平电泳槽
4）高速离心机
5）微量移液器及移液器吸头
1.2 试剂
1）琼脂糖
2）EB（溴化乙锭）
3）去离子水或双蒸水
注意事项   
5.1使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。
5.2 操作时应尽量少说话，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性；整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增应分区域进行，以避免交叉污染。 5.3 实验时，试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀（混匀时禁止激烈振荡，只需要进行上下倒置多次进行混匀）。
5.4 反应管中加好所有的试剂后，应尽快上PCR仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。
5.5细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测灵敏度，建议细胞在不含青霉素和链霉链等抗生素中进行培养2-3天后送样检测。
哌拉西林 Piperacillin 61477-96-1 100mg
柚皮速Ncringqnin480-41-1HPLC≥98%;20mg/vial
23S-轻基-11,15-二氧灵芝酸DM 23S-xy7noxy-3,7,11,15-teaoxo-lanost-8,24E-diene-26-oic acid 1085273-49-9 HPLC≥98% 5mg/支
含量测定克林霉素130422-2007052-8℃，避光100mg
毛冬青皂苷甲;毛冬青皂甙甲 Ilexsaponin A1 20mg HPL
氧化苦参碱 16837-52-8 检测用对照品 苦参素
狼牙刺Sophora viciifolia 羽扇豆鹼 550-90-3 C15H24N2O ≥97% 轻溴酸槟榔减01686-250
Dimetxylfraxetin白蜡树素6035-49-0涔皮素; 二甲基白蜡树亭20mg/支
Cloprostenol wo7ium录前列烯醇标准品55028-72-3400mg
红根草Salvia prionitis 13-Epimanool 13-表迈诺醇 1438-62-6 C20H34O ≥95%
多叶唐松草 Thalicum foliolosum DC. Protopine 原碱 130-86-9 C20H19NO5 ≥98%
D(十)-无水葡萄糖D(tqn)-cnxy7nousglucosq100mg/支
准葛尔乌头减 Songorine 509-24-0 20mg HPLC≥98% 准格尔乌头减 509-24-0用于含量测...
UV法含量测定爱普列特100572-200401常温，避光50mg
Didanosine地丹诺辛标准品69655-05-6200mg
TTC琼脂基础250g用于弯曲杆菌的TTC试验(GB标准)
布鲁氏菌培养基 250g 用于布鲁氏菌分离培养
PYG 液体培养基基础 PYG Broth Base 250 用于双歧杆菌增菌培养，使用时需加入氯化血红素和维生素K1(GB标准)
LPM琼脂基础(含七叶苷与柠檬酸铁铵)250g/瓶用于李斯特氏菌选择性分离，每培养基中添加incubationmediaLPM琼脂基础(含七叶苷与柠檬酸铁铵)250g/瓶用于李斯特氏菌选择性分离，每培养基中添加1414
AmiesTransportMedium
酪胨琼脂250g用于药品，生物制品无菌试验
PLET琼脂基础 250(g) incubation media PLET琼脂基础 250(g)
Half Fraser培养基 Half Fraser Medium 250克 李氏菌的增菌培养
霍乱双糖铁琼脂(KIA)250用于霍乱弧菌的生化试验(SN标准)incubationmedia霍乱双糖铁琼脂(KIA)250用于霍乱弧菌的生化试验(SN标准)
四酸盐煌绿增菌液(TTB肉汤) 10ml/支*20支 用于沙门氏菌选择性增菌培养。
用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3.先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
犬源性成分(Canine)核酸检测试剂盒1.在 6 号管中加入 5  μL 10E7 拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
2.换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
3.换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
4.NC 管中不加任何阳性对照。
5.从 1-6 号管中分别取 5  μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。 
一．PCR 检测（20 μL 体系）
1.在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次） 
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
3. 数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
 
 

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