猪轮状病毒A组(PRV-A)核酸检测试剂盒

产品名称：猪轮状病毒A组(PRV-A)核酸检测试剂盒
产品分类：荧光-PCR法
产品编号：BH11682P
产品规格：48T/盒
本试剂盒不但准确、快速、灵敏，还具有以下特点：
1.  即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单。
2.  预期的 PCR 产物长度为 494 bp。
3.  本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

规格及成分
即用型指标Mix 3.0（1.5 mL）
专一性引物对    （100 μL）
阳性对照        （50 μL）    
超纯水          （1 mL）
说明书：         1 份
猪轮状病毒A组(PRV-A)核酸检测试剂盒运输保存：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法    
1 实验所需器材与试剂
1.1 器材
1）PCR仪
2）PCR反应管
3）电泳仪及水平电泳槽
4）高速离心机
5）微量移液器及移液器吸头
1.2 试剂
1）琼脂糖
2）EB（溴化乙锭）
3）去离子水或双蒸水
注意事项   
5.1使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。
5.2 操作时应尽量少说话，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性；整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增应分区域进行，以避免交叉污染。 5.3 实验时，试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀（混匀时禁止激烈振荡，只需要进行上下倒置多次进行混匀）。
5.4 反应管中加好所有的试剂后，应尽快上PCR仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。
5.5细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测灵敏度，建议细胞在不含青霉素和链霉链等抗生素中进行培养2-3天后送样检测。
欧洲夹竹桃NeriumoleanderL. Oleandrin 欧夹竹桃苷 465-16-7 C32H48O9 ≥98%
月桂烯(香叶烯)Myrcqnq(myrcqnq)HPLC≥80%，0.5mL/支
知母 Anemarrhena asphodeloides Bge. Timosaponin B III 知母皂苷BⅢ 142759-74-8 C45H74O18 刺五加叶
含量测定更昔洛韦100380-200301常温，避光50mg
Dyphylline二羟丙茶碱标准品479-18-5200mg
异 DL-Isoborneol 分 子 量：154.2500 CAS编号：124-76-5 分子式：C10H18O 别　　名：莰醇-2;异莰酸-2;异冰片醇 【主要用途】
黄连 Coptis chinensis Franch. Palmatine chloride 言酸巴马汀 10605-02-4 C21H22ClNO4 亚西酸(100 08
含量测定异长春花苷内酰胺111778-2008012-8℃，避光20mg
猪轮状病毒A组(PRV-A)核酸检测试剂盒Dolaseon Mesylate甲磺酸多拉司琼标准品115956-13-3200mg
射
广金钱草Herba Desmodii Styracifolii Schaftoside 夏佛塔苷 51938-32-0 C26H28O14 ≥98%
连翘苷Phillyrin20mg/支
酯蟾毒配基;蟾力苏 Resibufogenin 465-39-4 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
中药对照药材通关藤121522-200501TLC法鉴别
BOSWELLIC ACID, a- 乳香酸度：>95%
布氏杆菌种子培养基250g用于布氏杆菌菌种复活、传代
Tryptic Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium) incubation media Tryptic Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium)
大肠杆菌 生物防治用菌。 支/瓶
ContactPlateMedium
卵黄高盐琼脂基础 250g 用于药品，生物制品金黄色葡萄球菌选择性分离
亚盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础(SPS)2803g用于食品和矿泉水中产气荚膜梭菌的分离培养和计数(GB/T8538-2008，GB/T4789.28-2003中4.69，GB/...
Super Broth Top Agar 培养基 250g incubation media Super Broth Top Agar 培养基 250g
荧光假单胞菌 支/瓶
万古霉素溶液支每支加入HB0中(GB标准)
BloodAgarBaseN0.2
用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3.先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
1.在 6 号管中加入 5  μL 10E7 拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
2.换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
3.换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
4.NC 管中不加任何阳性对照。
5.从 1-6 号管中分别取 5  μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。 
一．PCR 检测（20 μL 体系）
1.在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次） 
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
3. 数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
 
 

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