D-荧光素钾盐

特别提示：包括D-荧光素钾盐在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：D-荧光素钾盐
英文名称：D-Luciferin Potassium Salt
产品货号：KM0177
产品规格：100mg|500mg|1g|1g×5|1g×10

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，D-荧光素（底物）被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染进入细胞后，导入研究动物如大小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。


D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。

目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素（钠盐），和D-荧光素（钾盐）。这三种产品主要差别在于溶解特性。
1．D-荧光素（游离酸）在水以及缓冲体系内的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。
2．D-荧光素（钠盐）和D-荧光素（钾盐）能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成溶液后的三种产品，在绝大多数应用上都没有实质性的差别。
3．D-荧光素（钠盐）和D-荧光素（钾盐）基本上没有差别，主要是使用习惯等因素影响。整体来看，钾盐的应用文献明显多于钠盐。

主要参数：
CAS NO：115144-35-9
分子式：C11H7N2O3S2K
分子量：318.42g/mol
纯度：＞99%(HPLC)，分子生物学级（超纯）
外观：浅黄色至黄色粉末
溶解性：溶于水（60 mg/ml）
保存：-20℃干燥避光保存，有效期2年。

使用方法：

一、体外生物发光检测
1．储存液制备
  用蒸馏水溶解D-荧光素（钾盐），配制成15mg/ml的储存液（100×），混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。建议使用的工作液浓度为150μg/ml（相当于468μM）。
2．荧光素酶反应缓冲液制备
  配方(1×，参考Yuichi Oba,et al.,2003)：100mMTris-HCl（pH 7.8），5mM MgCl2，250μMCoA，150μMATP。具体缓冲液组成可参考其他文献资料来调整。按照以上配方制备荧光素酶反应缓冲液（2×）。
3．收集细胞裂解上清（荧光素酶表达）
  根据需要检测的细胞类型，选择合适的裂解液进行细胞裂解，离心收集上清后续检测待用。
4．萤火虫荧光信号检测
  注①：萤火虫荧光信号的检测方法大体上取决于冷光测定仪（luminometer）类型（是手动型荧光计、单管注射型或者酶标板读数型荧光计）。根据特定发光测定仪，来考虑注射用量和程序设置。
  注②：需设置不含荧光素酶的孔（用作阴性对照），以测定背景荧光。
  例：注射式冷光测定仪（injectible luminometer，单样或微孔板，200μL终体积）
  a．吸取100μL荧光素酶反应缓冲液（2×）到一干净的冷光测定仪比色皿或96孔板的各孔（最好使用全白平底的96孔板）；
  b．吸取50~98μL裂解上清到皿或孔内；
  c．如果有需要，用水来补足使得总体积到198μL；
  d．设置程序注射2μL荧光素储存液（使工作浓度150μg/ml），程序：2~5秒延迟（delay），之后10s测定。

二、活体成像分析
1．用无菌的PBS（w/o Mg2+）或者DPBS（w/o Mg2+）配制D-荧光素（钠盐）工作液（15mg/ml），0.2μm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。
2．注射量取决于注射方式，具体如下：

注射方式	剂量
静脉注射（25-27 gauge针头）	按10μL/g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液
腹腔注射（25-27 gauge针头）	按10μL/g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液
肌肉注射（27 gauge针头）	50μL，浓度为1-2mg/ml荧光素工作液
鼻内注射（pipette）	50μL，浓度为3mg/ml荧光素工作液

3．注射入体内10-20min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。
注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

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Y13799	虎红	5g|25g|100g
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