双显色抗小鼠IgG免疫组化试剂盒

特别提示：包括双显色抗小鼠IgG免疫组化试剂盒(CY3和过氧化物酶)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：双显色抗小鼠IgG免疫组化试剂盒(CY3和过氧化物酶)
英文名称：Double chromogenic Immunofluorescence kit for Mouse IgG(Cy3&POD)
产品货号：ZN1853
产品规格：1ml|2ml|5ml

本试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。CY3 比传统上的荧光更具有亲水性，因而不会因疏水性而引起非特异性吸附或聚合，从而背景更低。而且其敏感性和稳定性都更好。CY3 在 554nm 激化，在 568-574nm 发射荧光，呈鲜红色。免疫组化双显色试剂盒采用 CY3+过氧化物酶 POD 标记的链酶亲和素（SABC-CY3+POD），用户根据实验需要，可在同一张切片上用两套显示系统观察。

试剂盒组成：

组分	规格
正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)	1ml/2ml/5ml
生物素化兔抗大鼠IgG(参考效价1:100)	0.1ml/0.2ml/0.5ml
SABC-Cy3(参考效价1:100)	0.1ml/0.2ml/0.5ml
SABC-POD(参考效价1:100)	0.1ml/0.2ml/0.5ml

另附有四个滴瓶可供稀释试剂用。

保存条件：4℃可保存一年，应避免冷冻。

石蜡片染色步骤：
1. 石蜡切片，常规脱蜡至水。
2. 3%H2O2去离子水室温孵育5-10分钟,以消除内源性过氧化物酶活性,PBS冲洗,5分钟×3次。
3. 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4. 封闭。滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比 1:10)，37℃孵育30分钟，甩干，勿洗。
5. 滴加一抗(小鼠IgG)，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5分钟×3次。
6. 滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃孵育30分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。
7. 滴 加 SABC-Cy3(参 考 效 价1:100)或SABC-POD(参考效价1:100)，37℃孵育30 分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。
8. 显色液显色，镜下控制反应时间。显色剂可选DAB(ZN1968)。自来水充分冲洗。
9. 根据需要进行苏木素(ZN1971)复染，染色时间为0.5-2分钟。选用中性树胶，水溶性封片剂(ZN2946)或抗荧光衰减封片剂(ZN1974)封片。
10. 结果观察。荧光显微镜下有黄绿色颗粒者为阳性染色。普通光学显微镜下有棕黄色颗粒者为阳性染色。

建议：
1. 热修复可选用枸橼酸盐缓冲液(ZN1955)、EDTA抗原修复液(ZN1951)、PBS缓冲液、TBS缓冲液(ZN1953)等作为抗原修复液。
2. 酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、抗原修复液Ⅰ(ZN1954，与热修复配合使用)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。

根据您的关注的双显色抗小鼠IgG免疫组化试剂盒(CY3和过氧化物酶)，您可能还对以下产品有需求：



名称：Cy3抗大鼠免疫荧光染色试剂盒
货号：YT099
规格：>300次
本试剂盒含有Cy3标记的山羊抗大鼠IgG(H+L)抗体，可以用于检测大鼠来源的相应一抗，观察到的颜色为非常鲜艳的红色。Cy3是近年新开发的一种红色荧光探针。它比绝大部分其它的红色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液，可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月，并且在6个月内至少可以重复使用10次。本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片，至少可以检测300个样品。

注意事项：
1. 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光，特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3. 荧光物质均易发生淬灭，染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存，但存放时间通常不宜超过一周，随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。
4. 免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
5. 如果观察时发现荧光过弱，可以适当提高一抗的浓度；如果荧光还是比较弱，可以适当提高荧光标记抗体的浓度。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：封闭液(用PBS配置，含吐温20)
货号：YT872
规格：100ml
本品是最新一代的快速高效封闭液，总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液及国外同类产品，可以用于Western blot (WB)、Immunofluorescence (IF)、Immunohistochemistry (IHC)、Immunocytochemitry (IC) 等实验中的封闭、一抗或二抗的稀释。本产品配制在PBS中，含有适当浓度Tween-20。按照每张膜封闭需要5-10ml封闭液计算，一个包装的本产品 可以封闭10-20张膜。

本封闭液快速高效。封闭时间通常仅需5-15分钟，并且和BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等传统封闭液以及国外同类的快速 封闭液相比，显示出更强的信噪比(参考下图)。

本封闭液封闭后背景极低。本封闭液不含血清和白蛋白，确保极高的信噪比。

本封闭液兼容性好，兼容辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和生物素标记的二抗。本产品中添加了不影响HRP和AP活性的防腐剂，不会干扰HRP或AP标记二抗的检测。同时本产品不含生物素，不会干扰基于生物素的检测。

本封闭液使用灵活。本产品配制在含有适当浓度Tween-20的PBS中，可以直接用于相关实验，但也可以根据实验需要自行添加Tween-20或Triton X-100 至终浓度为0.05%-0.1%后用于封闭、一抗或二抗的稀释。

本产品与BSA及国外同类产品的封闭效果对比参见下图。在相同样品和实验条件下，仅封闭液及封闭时间存在如下图所示的差异时，我公司的本封闭液封闭后的整体背景明显低于BSA封闭后的背景，而且目的条带亮度明显高于国外同类品牌产品。


每组实验从左到右依次为：5μl蛋白Marker，2.5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液，5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液。请注意对于抗体A，本封闭液比BSA和国外同类产品具有更低 的背景，并且和国外同类产品相比信号明显更强。对于抗体B，本封闭液比BSA具有更低的背景，和国外同类产品相比信号明显更强。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

注意事项：
1. 本产品推荐仅使用一次，重复使用可能会导致封闭效果下降。但对于一些信噪比很高的一抗，例如一些内参抗体，本封闭液可以重复使用2-3次。回收的封闭液请勿与未使用 过的封闭液混合。
2. 通常本产品用于PVDF膜及NC膜时的封闭时间为5-15分钟。对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。此外，如有特殊需要，也 完全可以4℃封闭过夜。
3. 由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验，可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
4. 取放PVDF膜和NC膜应使用平头镊子，并仅轻轻夹取其边角，操作过程须避免膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。
5. PVDF膜一经浸润和活化，需一直保持湿润，根据Western进行到的具体步骤可放置于western转膜液或洗涤液等适当溶液中，否则可能会产生难以封闭的异常背景。

储存条件：4℃，有效期一年。

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