大肠杆菌JM101菌种

特别提示：包括大肠杆菌JM101菌种在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：大肠杆菌JM101菌种
英文名称：E.coli JM101 Strain
产品货号：BTN12-236y
产品规格：1 mL

大肠杆菌JM101菌株是J.Messing实验室构建的K-12系衍生菌株，主要用于克隆和质粒制备。

产品特点：
1．携带β-半乳糖苷酶ω片段，如果外源基因携带此酶的α片段，则可以进行蓝白斑筛选重组子。
2．可以抑制琥珀突变,故可以作为携带琥珀突变的质粒和噬菌体的宿主。
3．在基本培养基培养时需要补充硫氨。
4．本菌种无任何抗菌素抗性。

基因型：
大肠杆菌JM101菌种的基因型是：K-12,F′[traD36 proAB laqI^qZΔM15],glnV44,Δ(lac-proAB),thi。

大肠杆菌JM101菌株的基因型符号及其含义列表如下：：

基因型	表现型
K-12	K-12系的所有菌种默认都携带F因子和λ、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因，其产物可对甲基化的CG切割。
F"[traD36 proAB+ lacIqlacZΔM15	本菌株携带的F因子上还携带下列染色体基因：突变的traD36基因，使菌株能够发生结合但F因子转移能力丧失；野生型proAB+使菌株可以合成脯氨酸；突变的lacIq使得lac抑制蛋白过表达，降低lac启动子的背景表达；lacZ△M15的β-半乳糖苷酶基因可与携带α片段的质粒互补恢复酶活性，用于蓝白斑筛选
glnV44	更名为glnX44(Am)，使琥珀终止子编码谷氨酰胺，为部分噬菌体生长所需
△(lac-proAB)	缺失lac操纵子和脯氨酸合成基因，不能合成β-半乳糖苷酶和脯氨酸
thi-1	不能合成硫氨（维生素B1）

保存条件：-80℃，有效期一年

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名称：毕赤酵母GS115菌种
货号：BTN12-154y
规格：1 mL
GS115是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌的污染和生长。GS115毕赤酵母自身表型为Mut+，但是GS115转化株既能够产生出Mut+菌株，也能够产生出Muts菌株。目的蛋白在这两种转化株的表达水平可能是不同的，并且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到最好的酵母表达方案。

毕赤酵母适宜的生长温度是28至30℃，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。GS115毕赤酵母是是组氨酸缺陷型（His4基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10⁸。GS115毕赤酵母可以在YPD培养基(BTN130895)中生长，或者在补充有组氨酸的minimal media中生长，但是无法在单独的minimal media培养基中生长。

本菌株的基因型为His4，表型是Mut+。

使用方法：
质粒转化毕赤酵母GS115的菌株的方法有很多，如电转化、化学转化等。根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方法。

1．挑取酵母单菌落，接种至含有5mLYPD培养基的50 mL三角瓶中，30℃，250-300 r/min培养过夜；
2．取100-500 μL（≤1:100）的培养物接种至含有50 mL新鲜培养基的200 mL三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min培养过夜(约20小时)，至OD600达到1.3~1.5；
3．将细胞培养物于4℃，1500g离心5分钟，用50 mL的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；
4．按步骤3离心，用25 mL的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；
5．按步骤3离心，用2-5 mL，1M的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；
6．按步骤3离心，用160 μL的冰预冷的1M的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，其终体积约为240μL；
7．将5~20 μg的线性化DNA溶解在5~10 μL TE溶液中，与80 μL的上述步骤6所得的菌体混匀，转至0.2cm冰预冷的电转化杯中；
8．将电转化杯冰浴5分钟；
9．根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压1.5 kV；电容25 μF；电阻200 Ω；电击时间为4～10 msec）。
10．电击完毕后，马上加入1 mL 1M的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转至1.5 mL的EP管中，置于30℃摇床低速培养1小时；
11．将菌体悬液涂布于MD平板上，每200~600 μL涂布一块平板；
12．将平板置于30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4天）。

保存条件：-80℃

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