大肠杆菌ET12567(pUZ8002)菌种

特别提示：包括大肠杆菌ET12567(pUZ8002)菌种在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：大肠杆菌ET12567(pUZ8002)菌种
英文名称：E.coli ET12567(pUZ8002) Strain
产品货号：BTN12-181201
产品规格：0.5ml

大肠杆菌ET12567(pUZ8002)主要用来进行链霉菌基因操作，是链霉菌基因敲除或者基因倍增通用的菌株。

产品特点：
1．携带pUZ8002质粒，此质粒的tra基因编码转移蛋白Tra，使得质粒DNA能从大肠杆菌转移到链霉菌。
2．是甲基化缺陷型，故其转移的质粒DNA不会被大部分有甲基修饰系统的链霉菌降解。如果链霉菌受体菌不含甲基化修饰系统，则也可以使用DH5a(pUZ8002)菌作为供体菌。
3．培养时需要加入25 μg/mL氯霉素和25 μg/mL卡那霉素以维持细胞内pUZ8002伴侣质粒的存在。
4．跟ET12567(pUZ8002)兼容的质粒是pSET152 和pKC1139。

的基因型和表现型：

基因型	表现型
F-	不携带F质粒
ara-14	阿拉伯糖异构酶失活，不能利用阿拉伯糖
dam-13::Tn9	含转座子Tn9
dcm-6	Dcm修饰限制系统的胞嘧啶甲基化酶失活，不能甲基化CCWGG的第二个C
galK2	半乳糖激酶失活，不能利用半乳糖，2脱氧半乳糖抗性
galT22	半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶失活，不能利用半乳糖，2脱氧半乳糖抗性
glnV44	同supE，使琥珀终止子编码谷氨酰胺
hisG4	不能合成组氨酸
hsdM	EcoK修饰限制系统的腺嘌呤甲基化酶失活
hsdR	EcoK修饰限制系统的限制性内切酶失活
lacY1	半乳糖苷通透酶突变，不能利用乳糖
leuB6	β-异丙基苹果酸脱氢酶失活，不能合成亮氨酸
mtl-1	不能利用甘露醇
recF143	recF重组途径缺失，降低质粒间的重组
rpsL136	30S核糖体S12突变，导致对链霉素抗性
thi-1	不能合成硫氨（维生素B1）
tonA31	外膜蛋白突变，抗T1、T5、φ80噬菌体感染
tsx-78	外膜蛋白突变，抗T6噬菌体感染和大肠杆菌毒素K
xyl-5	不能利用木糖
zjj-202::Tn10	Zjj-202含Tn10插入，有四环素抗性

保存条件：-80℃，有效期一年

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名称：毕赤酵母GS115菌种
货号：BTN12-154y
规格：1 mL
GS115是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌的污染和生长。GS115毕赤酵母自身表型为Mut+，但是GS115转化株既能够产生出Mut+菌株，也能够产生出Muts菌株。目的蛋白在这两种转化株的表达水平可能是不同的，并且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到最好的酵母表达方案。

毕赤酵母适宜的生长温度是28至30℃，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。GS115毕赤酵母是是组氨酸缺陷型（His4基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10⁸。GS115毕赤酵母可以在YPD培养基(BTN130895)中生长，或者在补充有组氨酸的minimal media中生长，但是无法在单独的minimal media培养基中生长。

本菌株的基因型为His4，表型是Mut+。

使用方法：
质粒转化毕赤酵母GS115的菌株的方法有很多，如电转化、化学转化等。根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方法。

1．挑取酵母单菌落，接种至含有5mLYPD培养基的50 mL三角瓶中，30℃，250-300 r/min培养过夜；
2．取100-500 μL（≤1:100）的培养物接种至含有50 mL新鲜培养基的200 mL三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min培养过夜(约20小时)，至OD600达到1.3~1.5；
3．将细胞培养物于4℃，1500g离心5分钟，用50 mL的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；
4．按步骤3离心，用25 mL的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；
5．按步骤3离心，用2-5 mL，1M的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；
6．按步骤3离心，用160 μL的冰预冷的1M的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，其终体积约为240μL；
7．将5~20 μg的线性化DNA溶解在5~10 μL TE溶液中，与80 μL的上述步骤6所得的菌体混匀，转至0.2cm冰预冷的电转化杯中；
8．将电转化杯冰浴5分钟；
9．根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压1.5 kV；电容25 μF；电阻200 Ω；电击时间为4～10 msec）。
10．电击完毕后，马上加入1 mL 1M的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转至1.5 mL的EP管中，置于30℃摇床低速培养1小时；
11．将菌体悬液涂布于MD平板上，每200~600 μL涂布一块平板；
12．将平板置于30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4天）。

保存条件：-80℃

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