冻存培养基:
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1)细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基,其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化,可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2)冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基,含10% DMSO,适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案:
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低 1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
小鼠心肌成纤维细胞试剂盒说明书细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
RPromocell C-25210 Hepatocyte Basal Medium , 肝细胞基础培养基 500ml甲基麦冬二氢高异黄酮A,甲基麦冬黄烷酮AMethylophiopogonanone A 质量规格:HPLC≥98%,标准品
人前列腺平滑肌细胞裂解物HPSMCL甲基麦冬黄烷酮BMethylophiopogonanone B质量规格:HPLC≥98%,标准品
DLL1 Others Rat 大鼠 DLL1 / Delta-like 人细胞裂解液 (阳性对照) 7,2'-二羟基-3′,4′-二甲氧基异黄烷7,2-Dihydroxy-3,4-Dimethoxyisoflavan质量规格:HPLC≥98%,标准品
BHK-21 叙利亚仓鼠肾细胞6aR,11aR)3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷3-Hydroxy-9,10-Dimethoxypterocarpan质量规格:HPLC≥98%,标准品
CL-0150MDA-MB-231(人癌细胞)5×106cells/瓶×2千层纸素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷Oroxyloside质量规格:HPLC≥98%,标准品
Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 C6(脑胶质瘤细胞)丹曲林钠质量规格:>98.5%Dantrolene sodium
T-110B透明质酸酶(含100mL酶解缓冲液)10mL丹曲林钠(标准品)质量规格:>98%,标准品Dantrolene sodium
CD200 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200 人细胞裂解液 (阳性对照) 水杨苷质量规格:≥98%,BRD-(−)-Salicin
口腔角质细胞生长添加物OKGS水杨苷(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品D-(−)-Salicin
HEC-1-B细胞,人子宫内膜腺癌细胞 大鼠脑膜细胞,RMC细胞 胰腺癌组织源性原代细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)/1ml厚朴酚质量规格:≥98%,BRMagnolol
CM-R104大鼠脑膜细胞完全培养基100mL霉酚酸酰基 β-D-葡萄糖苷酸质量规格:美国进口Mycophenolic Acid Acyl-β-D-glucuronide
小鼠胚胎成纤维细胞;BALB/C 3T3 小鼠骨髓基质细胞完全培养基 100mL阿莫西林-d4质量规格小鼠心肌成纤维细胞试剂盒说明书:美国进口Amoxicillin-d4
人星形胶质细胞 Human阿莫西林三水合物质量规格:美国进口Amoxicillin trihydrate
CD9 Others Human 人 CD9 / Tspan-29 人细胞裂解液 (阳性对照) 二氢非诺贝特质量规格:美国进口Dihydro Fenofibrate
羊源细胞没食子酸质量规格:>98%,BRGallic acid