冻存培养基:
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1)细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基,其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化,可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2)冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基,含10% DMSO,适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案:
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.人膀胱上皮细胞培养试剂盒说明书配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低 1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.人膀胱上皮细胞培养试剂盒说明书细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
RTNFRSF1B Others Human 人 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人细胞裂解液 (阳性对照) 抗蛋白酶(进口)Antipain dihydrochloride质量规格:美国进口
人神经束膜细胞HPCD-岩藻糖D-(+)-FUCOSE质量规格:>98%,日本进口原装
CD44 Others Human 人 CD44 人细胞裂解液 (阳性对照) N-乙酰-DL-丝氨酸N-Acetyl-DL-Serine质量规格:>98%,BR
L132 人肺上皮细胞玉米素Zeatin质量规格:>98%,BR
CM-H059人子宫颈上皮细胞完全培养基100mL水飞蓟素Silymarin质量规格:水飞蓟素UV 80%;单宾30%
IFNGR1 Others Human 人 IFNγR1 / CD119 人细胞裂解液 (阳性对照) D-苏氨酸质量规格:>98%,BRH-D-Thr-OH
豹猫肌肉成纤维样细胞;LCM4D-色氨酸甲酯盐酸盐质量规格:0.98D-Tryptophan methyl ester hydrochloride
IFNA13 Others Mouse 小鼠 IFNA13 / Ierferon alpha-13 人细胞裂解液 (阳性对照) 头孢呋辛酯(标准品)质量规格:效价测定Cefuroxime axetil
JEG-3 人绒毛膜癌细胞青霉素G钾盐质量规格:>1500U/mg,USP,BRPenicillin G, potassium salt
WPMY-1人正常前列腺基质永生化细胞 WPMY-1 of normal human prostate somal immortalized cell DMEM+5%FBS青霉素G钾(标准品)质量规格:效价测定Penicillin G, potassium salt
EDAR Others Cynomolgus 食蟹猴 EDAR 人细胞裂解液 (阳性对照) 1-[3-(三甲氧基硅基)丙基]脲(>94.0%(N))质量规格:>94.0%(N)1-[3-(Trimethoxysilyl)propyl]urea
叙利亚仓鼠细胞系;Syrian Hamster AV12苄酰基无色亚甲基兰(>95.0%(HPLC)(T))质量规格:>95.0%(HPLC)(T)Benzoyl Leuco Methylene Blue
Calu-3细胞,人肺腺癌细胞(胸膜渗出液) 大鼠肝星形细胞,CFSC-8B细胞 CM-M089小鼠皮肤肥大细胞完全培养基100mL结晶紫内酯(>95.0%(HPLC)(T))质量规格:>95.0%(HPLC)(T)Crystal Violet Lactone
人膀胱上皮细胞培养试剂盒说明书SiHa(人子宫颈鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×26'-(二乙氨基)-1',3'-二甲基荧烷(>98.0%(HPLC)(T))质量规格:>98.0%(HPLC)(T)6'-(Diethylamino)-1',3'-dimethylfluoran
HUVEC-c 单一来源的人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 500,000cells 表皮角化细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)三丁基化锍(>96.0%(T))质量规格:>96.0%(T)Tributylsulfonium Iodide