试剂组分(WLB8201KITWLB8201KITWLE8202KIT,48T/盒) | |||
组成 | 规格 | 数量 | 功能 |
A buffer | 1.6ml | 1管 | 主要为稳定蛋白/酶,性能的缓冲体系 |
B buffer | 0.15ml | 1管 | 主要为镁离子等激活体系 |
正对照模板 | 0.1ml | 1管 | 主要是阳性质粒模版为检验试剂盒的有效性 |
正对照引物MIX | 0.06ml | 1管 | 主要是正对照模版的引物组合 |
冻干粉试剂 | 8T/排,16T/包 | 3包 | 蛋白/酶体系的试剂工艺:冻干粉、冻干微球 |
原理概述:
本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下,重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体 Rec/ssDNA,在辅助蛋白和单链结合蛋白 SSB 的帮助下,侵入双链 DNA 模板;在侵入位点形成 D-loop区域,并开始对 DNA 双链进行扫描;待找到与引物互补的目的区域后,复合体Rec/ssDNA 解体的同时,聚合酶也结合到引物的 3’末端,开始链的延伸。本试剂盒在39 ºC 下,依赖核酸外切酶的作用,加入根据模板设计的特异的分子探针,使用荧光监测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。
引物设计:
建议使用长度在 30-35 bp 的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;引物设计避免形成二级结构而影响扩增;扩增子长度建议在 150-300 bp,通常不超过 500 bp。
荧光探针设计Fluorescent probe design:
探针序列不与特异性引物识别位点重叠,长度为 46-52 nt,序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。探针共有四个修饰位点:距离 5’端的≥ 35 nt 的中部位置标记一个 dSpacer(四氢呋喃,THF),作为核酸外切酶的识别位点;THF 位点的上游标记一个荧光基团,下游标记一个粹灭基团,两个基团的间距为2-4 nt;THF 距离3’末端≥15 nt,并且 3’末端标记一个修饰基团,例如胺基、磷酸基团或 C3-Spacer。
正对照荧光结果图: P:正对照;N:阴性对照
产品特点及优势:
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需 20 min)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。可适用于各种品牌的荧光定量 PCR 仪、恒温荧光扩增仪器等荧光检测设备。
适用于实验室级别的DNA扩增以及其他检测用途的DNA扩增使用。
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