ECL（鲁米诺）化学发光试剂盒

ECL（鲁米诺）化学发光试剂盒
货号：
PN3300  ECL超敏型化学发光液
PN3301  ECL增强型超敏化学发光液
产品规格：1.5mL×2/12.5mL×2/50mL×2
储存条件 : 4℃，密封，避光
产品介绍：
ECL化学发光试剂盒能够被辣根过氧化物酶（HRP）催化发光。本试剂盒优化了底物组成，使用了新型高效增强剂，发光强度比传统 ECL显色液提高了30-100倍，并有效地降低了背景。试剂盒使用新的氧化剂代替不稳定的双氧水，提高了试剂盒的稳定性，室温可稳定放置1年。工作液被 HRP 催化后，发出特定波长荧光（400-450 nm），可对X光胶片曝光，也可直接使用荧光CCD扫描，主要应用于Western 检测以及化学发光免疫检测系统。
使用说明：
一、缓冲液的配置：
1、一抗工作浓度：0.2-1.0 µg/mL；
2、HRP 标记二抗工作浓度：10-500 ng/mL，根据二抗效价调整。
3、显色液的使用比例：A液: B液 = 1:1（现用现配）；10 cm²转印膜使用1-2 mL工作液。
二、操作步骤：

1. 根据常规操作转印结束后，进行封闭、一抗孵育、二抗孵育以及必要的洗膜步骤，根据膜的大小，按每 10cm²膜使用1-2mL工作液，按比例吸取等体积溶液A和溶液B混匀，配制成发光检测工作液。
2. 用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体。用移液器将工作液加到转印膜上，使其均匀覆盖，室温孵育 1-2 分钟，此步骤可在洁净保鲜膜上或塑料盒中完成。
3. X 光胶片法

1. 用平头镊子夹起转印膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体，留下少量工作液，不要让膜完全干燥。膜的蛋白面朝上，包裹于洁净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡用小块透明胶带粘住四角，固定在 X 光片暗盒内。
2. 在暗室中取一张X光胶片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30秒至1分钟。立即显影、定影，根据曝光强度，调整下一张X光胶片的曝光时间。如果背景过高，可以使用两张X光胶片同时压片。

1. 荧光拍照法：

1. 如果需要使用 CCD 拍照，可以将膜放置于工作液中，开机后按照使用说明，将转印膜取出，进行拍照。
2. 可以根据背景情况，调整机器测量参数，提高信噪比。

1. 管式化学发光法：

1. 将ECL的化学发光检测波长可设定在 425nm 左右，可以选择单点测量，或者取多次平均值。
2. 按照机器要求，将配制好的工作液加入到样品管中，间隔一定时间测量发光强度，注
3. 意ECL系统的发光到达峰值有一定延迟（30-300 秒），不同样本的测量时间间隔要固定。
4. HRP 催化ECL发光的体系还受到反应温度以及 pH 的强烈影响，所以工作试剂准备以及发光测量需要考虑到此类因素。

注意事项：

1. 试剂盒溶液A为底物，保存于避光试剂瓶中，溶液B为氧化剂。通常取样顺序是先取底物 溶液A，换枪头后再取氧化剂溶液B。
2. 本试剂盒较为稳定，室温（25℃）可以保存一年以上，长期不用建议保存在 2-8℃。
3. 使用生物素-亲和素系统时，避免使用牛奶封闭，可能会造成背景过高。
4. 金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，可以使用平头塑料镊子。
5. 叠氮化钠抑制 HRP 的催化能力，在缓冲液中尽量避免使用叠氮化钠作为防腐剂。
6. 封闭、洗膜、孵育等步骤耗时较长，注意膜与塑料界面的摩擦不均匀可能造成部分位置条带消失，可以在保鲜膜中孵育以及封闭，洗膜的塑料盒底面不要有明显凸起，可以通过剪角的方法，区别转印膜有蛋白的一面。
7. 不同转印膜对蛋白的吸附能力不同，硝酸纤维素较软，避免出现折痕。PVDF膜使用前需要使用甲醇水化均匀。
8. 勿将多张膜置于同一个洗膜盒中洗膜，相互吸附以及摩擦可能造成很深的背景。
9. 转印、封闭、孵育都要避免气泡。CB3120    红细胞保存液（阿氏液）     100ml/500ml
   CB3140    台式液     500ml
   CB1320    L-谷氨酰胺(L-Glutamine，Liquid)(200mM)   100ml
   CB1330    Sodium Pyruvate (100mM)      100ml
   CB1030    D-PBS，液体，不含钙、镁和酚红       500ml
   CB1040    Hanks，含钙镁，含酚红（HBSS）       500ml
   CB1041    Hanks，含钙镁，不含酚红（HBSS）  500ml
   CB1045    D-Hanks，不含钙镁，含酚红（HBSS）       500ml
   CB1046    D-Hanks，不含钙镁，不含酚红（HBSS）  500ml
   CB1060    EBSS，含钙镁，含酚红 500ml
   CB1061    EBSS，含钙镁，不含酚红     500ml
   CB1065    EBSS，不含钙镁，含酚红     500ml
   CB1066    EBSS，不含钙镁，不含酚红 500ml
   ABT920    青链霉素混合液(100×) 双抗       100ml
   ABT931    青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液(100×三抗)      100ml
   ABT932    青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗)  100ml
   CB3110    红细胞裂解液（无菌）         100ml/500ml
   CB1400    EDTA消化液(0.02%)       100mL
   CB1410    胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)含酚红       100ml
   CB1411    胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)不含酚红   100ml
   CB1413    胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚红         100ml
   CB1414    胰蛋白酶消化液(0.25%)含酚红    100mL
   CB1000    无菌去离子水(For Cell Culture） ddH2O      100ml/500ml
   CB1010    1×PBS，pH7.2-7.4，0.01M，细胞培养级 注意         500ml/500ml*10
   CB1020    10×PBS，pH7.2-7.4，细胞培养级 注意     500ml/500ml*10
   CB3130    改良台式液     500ml
   CB6020    细胞洗涤液     500ml
   CB6100    人外周血淋巴细胞分离液     200ml
   CC1120    Hoechst 33258染色液（即用型）        10ml/50ml
   CC1121    Hoechst 33258染色液(1mg/ml） 1ml/10*1ml
   CC1140    Hoechst 33342染色液（即用型）        10ml/50ml
   CC1141    Hoechst 33342染色液(1mg/ml） 1ml/10*1ml
   CC1160    DAPI溶液（即用型）    10ml/50ml
   CC1161    DAPI溶液（1mg/ml）   1ml/10*1ml
   CC1180    台盼蓝染色液(0.4%)       50ml/100ml
   CC1181    碘化丙啶PI溶液（1mg/ml）        1ml/10*1ml
   CC1210    MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒         500T
   CC1410    CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒      100T/500T
   CB2110    通用细胞冻存液     50ml
   CM10491 RPMI 1640，含D-葡萄糖、碳酸氢钠、Sodium Pyruvate、HEPES 和 L-谷氨酰胺  500ml
   CM11875 RPMI Medium 1640，含L-谷氨酰胺、酚红，不含Sodium Pyruvate、HEPES   500ml
   CM11965 DMEM 高糖，含L-谷氨酰胺、酚红，不含Sodium Pyruvate、HEPES      500ml
   CM11995 DMEM 高糖，含L-谷氨酰胺、酚红、Sodium Pyruvate，不含HEPES      500ml
   CM12100 DMEM（高)(H)（含酚红 不含Sodium Pyruvate)         500ml/20*500ml
   CM31600 DMEM(L) 500ml/20*500ml
   CM31800 RPMI Medium 1640         500ml/20*500ml
   CB1110    1M Hepes溶液(Free Acid，无菌)  100ml/500ml
   CB1111    1M Hepes溶液(PH7.2-7.4，无菌) 100ml/500ml
   CB1340    NAAS 非必需氨基酸(100×) 100ml

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3 蛋白免疫学：裂解、蛋白纯化、层析填料、蛋白定量、凝胶制备、蛋白电泳、显色曝光、免疫检测、抗原抗体ELISA等各种蛋白免疫实验的缓冲液试剂耗材盒子。
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