T4 UvsX重组酶 T4 UvsX Recombinase是一种来源于T4噬菌体的重组酶,属于RecA/Rad51丛的酶,它在RPA反应中发挥关键作用。T4 UvsX重组酶具有典型的ABC三结构域,分别负责ATP结合,相互作用与DNA结合。它通过识别单链DNA上连续的6-8个核苷酸碱基,与DNA形成球状多聚体结构。
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T4 UvsX Recombinase由E.coli表达的重组蛋白,是将蛋白基因接入稳定表达载体,经克隆筛选,质量验证,挑选的稳定表达株,由化学成分确定的培养基(不含有任何动物源成分)发酵制备,工艺稳定,保证了产品质量及批次间的一致性。
规格参数:
货号:EH03501
规格:100ug/1mg/5mg/20mg
为工业客户提供g级。
质量控制:
纯 度: 经高效液相色谱(SEC-HPLC)和SDS-PAGE检测,纯度大于95%.
使用说明:
长期储存于-80℃,首次使用后保存于-20℃,避免反复冻融。
工作机理:
T4 UvsX重组酶 T4 UvsX Recombinase在RPA反应中的主要作用是:
(1)稳定单链DNA
在常温下,双链DNA初变性为单链DNA后,T4 UvsX Recombinase立即识别并结合单链DNA,形成稳定的蛋白-DNA复合体,防止单链DNA再次回环成双链。
(2)引物退火
在T4 UvsX Recombinase的保护下,引物与单链DNA进行退火,与之形成短的双链DNA片段。
(3)替换与释放
当聚合酶识别引物-模板双链体并开始进行延伸时,T4 UvsX Recombinase被替换并释放,使单链DNA完全暴露,供聚合酶延伸。
(4)再循环
延伸产生的新合成DNA同样暴露为单链,T4 UvsX Recombinase再次识别并结合,实现再循环,直至扩增完成。
T4 UvsX重组酶优点:
可在常温下高效稳定单链DNA,这是RPA实现等温扩增的关键。
与DNA的结合和释放是反复可逆的,这使其在RPA反应中的再循环利用成为可能。
易于保存和纯化,更利于RPA技术的商业化开发。
目前已有成熟的生产工艺,降低了RPA成本,有利于其广泛应用。
T4 UvsX重组酶在RPA技术中主要应用如下:
1. RPA反应中的关键酶
T4 UvsX Recombinase在RPA反应中用于稳定和保护单链DNA,并在引物退火和聚合酶延伸过程中实现替换和再循环,这是RPA技术实现等温扩增的关键。
2. 商业RPA试剂盒
许多商业RPA试剂盒中的重组酶成分主要由T4 UvsX Recombinase提供,如TwistDx的Recombinase Polymerase Amplification kit等。
3. POCT检测试剂
RPA技术因其快速、简便的优点,非常适合POCT。而T4 UvsX Recombinase的应用是实现RPA的POCT检测试剂的关键。一些基于此的产品已用于临床快速诊断,如Ebola病毒、Meningitis等的检测。
4. 病原体核酸检测
设计与特定病原体高度保守的基因片段同源的引物,与T4 UvsX Recombinase及RPA技术联用,可实现病原体DNA/RNA的快速、高灵敏度检测,用于临床病原体感染的诊断。
5. 基因检测与分型
针对特定的基因突变或多态性位点设计引物,与T4 UvsX Recombinase及RPA技术联用,可用于相关基因型的检测与分型,应用于遗传病基因诊断等。
6. 体外核酸检测
将与靶核酸同源的引物与T4 UvsX Recombinase及RPA技术联用,可实现体外各种DNA、RNA的高通量检测,如miRNA、circRNA的检测等,用于生物学基础研究与临床诊断。
7. 转基因生物检测
设计特异性引物扩增转基因片段,与T4 UvsX Recombinase及RPA技术联用,可实现转基因生物的快速检测,用于食品安全等领域。
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相关RPA原料:
EH03201 Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase
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