LbuCas13a是一种来源于细菌 Leptotrichia buccalis的Cas13a效应蛋白。它属于IV型CRISPR-Cas系统,可利用CRISPR RNA(crRNA)来识别和切割RNA。LbuCas13a相对分子质量约为132kDa。它包含两个高度保守的结构域:HEPN和RuvC,与crRNA结合后可激活其内切酶活性,对RNA进行切割。
本产品由E.coli表达的重组蛋白,是将蛋白基因接入稳定表达载体,经克隆筛选,质量验证,挑选的稳定表达株,由化学成分确定的培养基(不含有任何动物源成分)发酵制备,工艺稳定,保证了产品质量及批次间的一致性。
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规格参数:
货号:EH00302
规格:100/1000pmol.
为工业客户提供n*1000pmol规格
质量控制:
纯 度:
经高效液相色谱(SEC-HPLC)和SDS-PAGE检测,纯度大于95%.
使用说明:
长期储存于-80℃,首次使用后保存于-20℃,避免反复冻融。
技术原理:
LbuCas13a通过碱基配对识别crRNA和目标RNA之间的同源序列,与之结合后激活,在目标RNA进一步切割其他区域,这被称为“异核酶的自恢复特征”。该过程可导致高效的RNA分解。
特点与优势:
(1) LbuCas13a可特异性识别和切割RNA,而非DNA,这令其成为CRISPR系统中首个RNA靶向的工具。
(2) LbuCas13a具有RNA的自恢复切割功能,可导致RNA高效降解,这有利于RNA的功能研究及基于RNA的治疗方法的开发。
(3) LbuCas13a对温度和离子环境不太敏感,在宽范围的条件下保持稳定和活性,易于保存及操作。
(4) LbuCas13a可识别不同长度(约23-38 bp)的crRNA,这为其RNA靶向带来更高的灵活性。
LbuCas13a在以下方面具有重要应用潜力:
(1) RNA功能研究:实现特定RNA的敲除与破坏,用于研究RNA在生物体中的生理功能。
(2) RNA病毒检测与治疗:可用于检测和抑制RNA病毒的增殖。
(3) 离体和在体基因治疗:利用LbuCas13a表达载体传递crRNA,抑制靶细胞内的病理性RNA。
(4) 体外RNA检测:设计与靶RNA同源的crRNA,检测样本中靶RNA的存在与表达水平。
(5) 农业病害治疗:抑制植物病原体中的关键RNA,达到防治作用。
LbuCas13a在体外诊断领域有重要的应用潜力:
1. RNA病毒检测
设计与RNA病毒基因组高度保守的区域互补的crRNA,可特异性检测该病毒的存在,用于临床病毒性疾病的快速诊断。
2. 体外RNA表达检测
针对特定RNA标记物设计crRNA,可检测样本中靶RNA的表达水平,用于癌症诊断、疾病检测等。
工作流程如下:
(1) 设计与靶RNA高度同源的crRNA序列。
(2) 将crRNA与待检测样本RNA共孵育。
(3) 如果存在互补的靶RNA,LbuCas13a与之结合并激活,对靶RNA进行切割。
(4) 通过qPCR检测LbuCas13a切割产物或其活性,判断靶RNA的存在与表达量。
(5) 该方法灵敏度高、特异性强,可实现RNA的高通量检测,相比传统方法更加简便快速。
3. 细胞RNA谱检测
利用LbuCas13a及对应的crRNA库,可以检测细胞中全 transcriptome RNA的表达变化,用于药理学研究、疾病诊断等。
4. 病原体RNA检测
针对病毒、细菌等病原体的保守RNA区域设计crRNA,实现特异性病原体检测,用于临床快速诊断。
5. 非编码RNA检测
设计与靶向miRNA、lncRNA等互补的crRNA,实现非编码RNA的高通量检测与定量分析。
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