总多酚含量测试试剂盒惠诚生物现货供应

总多酚含量测试试剂盒
（C001-96T 分光光度计法）
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一、 测定原理
福林酚试剂氧化多酚中-OH基团并使其显蓝色，蓝色的深浅与多酚的含量成正相关，没食子酸一般在该方法中被默认为标准物质，采用没食子酸溶液制作标准曲线，然后将多酚含量表示为等价没食子酸的量，即可求得待测样品中总多酚含量。
二、 试剂组成
试剂一：酚试剂25mL×1瓶
试剂二：显色液 200mL ×1瓶
试剂三：1.0mg/mL没食子酸标准溶液 20mL×1瓶
三、 储存条件及有效期
试剂一、试剂二4℃保存，试剂三-20℃保存，可保存3个月。
四、 试剂的配制
试剂一应用液：将试剂用双蒸水10×稀释，制备成酚应用液，每次测试需使用2.5mL，根据样品数量计算好，用多少配制多少。
例：需要进行38次测试，则可配制40次使用量：40×2.5mL=100mL，量取10mL试剂一加入90mL双蒸水，充分混匀即可。
试剂三应用液：
分别采用移液管移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL试剂三于100mL容量瓶中，采用双蒸水定容至刻度，摇匀，制成浓度分别为10，20，30，40，50μg/mL的没食子酸应用液。
习惯用使用移液器的老师也可先在15mL离心管中分别加入9.9，9.8，9.7，9.6，9.5mL双蒸水，再采用移液器分别移取100，200，300，400，500 μL 试剂三于相应的离心管中，充分颠倒混匀，制成浓度分别为10，20，30，40，50μg/mL的没食子酸应用液。
五、 操作步骤

	标准管1	测定管
试剂一应用液（mL）	2.5	2.5
样品溶液（mL）		0.5
试剂三应用液（mL）	0.5

充分混匀，室温静置5min使之充分反应²。

试剂二（mL）3

2

2

充分混匀，室温静置60min⁴，使用1cm光径比色皿，765nm处采用分光光度计测定吸光度。
¹必须做标准管，以绘制标准曲线；
²3-8分钟均可，但标准管和所有测定管反应时间应保持一致；
³如样品颜色较深，可做对照管，对照管将试剂二改为双蒸水；
⁴最短40min，建议60min以保证反应充分。
六、计算方法
1.绘制标准曲线
以没食子酸应用液浓度0，10，20，30，40，50μg/mL为横坐标，以分光光度计测得的吸光值为纵坐标，在坐标纸上或利用EXCEL绘制标准曲线。
2.计算样品浓度
对于坐标纸上绘制的标准曲线，请直接根据坐标求得样品浓度。
对于采用EXCEL计算的，根据方程求得样品浓度。
样品浓度表示为μg/mL没食子酸，或μg/mL gallic acid equivalent (GAE) 。也可根据测试溶液浓度计算出样品粉末中含量，表示为mg/g GAE。
七、注意事项
1. 一些植物提取物中多酚含量很高，建议首先摸索稀释倍数，若测定数值超出标准曲线线性范围，则不可采纳该读数。应将样品稀释后重新测定；
2. 各管反应时间尽量保持一致，因此不建议一次性测试过多样品；
3. 试剂三应用液应现配现用，不可久放。
八、应用举例
小明提取得到了一种中草药的粗提物，并将其冻干得到粉末，配制成5mg/mL的溶液，分析其总多酚含量。
小明预估自己的样品中多酚含量较高，于是将样品10×，100×，500×稀释，分别得到500μg/mL，50μg/mL，10μg/mL的样品，并标记为1，2，3号样品。然后小明按照说明书提示进行总多酚含量的测试，测试结果如下：

样品名称	样品浓度	吸光值
		重复1	重复2	重复3	平均值
标准品	0	0.012	0.016	0.012	0.013
	10	0.15	0.158	0.157	0.155
	20	0.273	0.284	0.282	0.280
	30	0.428	0.427	0.432	0.429
	40	0.545	0.548	0.546	0.546
	50	0.677	0.670	0.673	0.673
样品3		0.048	0.043	0.045	0.048
样品2		0.148	0.152	0.148	0.148
样品1		1.028	1.045	1.053	1.028

小明根据标准品测试结果，采用EXCEL作图，得到标准曲线如下：

计算出的相关系数＞0.999，小明认为该标准曲线可用。于是小明利用该标准曲线计算自己样品的多酚浓度，得到结果如下：
样品3：1.980μg/mL
样品2：9.859μg/mL
样品1：77.485μg/mL
因为样品1的平均吸光值1.028大于标准曲线中的最大吸光值0.673，认为不在线性范围，舍弃；样品2、3的平均吸光值0.148，0.048均在标准曲线线性范围内，且样品2、3的浓度差异约为5倍，认为其浓度是可信的，但相比较而言，样品3的吸光值偏小，误差相对较大，因此小明决定采用样品2的数据计算样品的总多酚含量。
即：50μg/mL中草药粗提物样品中，多酚含量为9.859μg/mL等价没食子酸，经换算，小明得知，该中草药粗提物冻干样中多酚含量为：9.859÷50×1000mg/g = 197.180 mg/g等价没食子酸，或表示为197.180 mg/g GAE。


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