超氧阴离子自由基清除能力测试试剂盒现货

超氧阴离子自由基清除能力测试试剂盒
（A002-96T分光光度计法）
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一、 测定原理
该方法利用NADH-PMS-NBT为超氧阴离子(O₂^·-)生成系统，超氧阴离子清除剂能减少NBT的蓝色。通过检测560nm处吸光值可判断体系中还原物质的还原能力。
二、 试剂组成
试剂一：液体40mL×1瓶；
试剂二：液体1mL一瓶；
试剂三：粉剂一支；
试剂四：粉剂一支；
试剂五：1mg/mL芦丁标准品，1mL。
三、 储存条件及有效期
试剂盒-20℃可保存6个月。
四、 试剂的配制
试剂一工作液：用时加双蒸水360mL，也就是10倍稀释，得到400mL试剂一工作液；
试剂二工作液：用赠送的棕色瓶配制。试剂二工作液由试剂二加上100mL试剂一工作液配得，现配现用，注意避光；
试剂三工作液：试剂三工作液由试剂三溶解于100mL试剂一工作液配得，现配现用；
试剂四工作液：粉剂一支。用50mL双蒸水溶解，摇匀后，取10mL，加入90mL试剂一，配成试剂四工作液，现配现用，用赠送的棕色瓶盛装。注意避光，配好的试剂请于2小时内用完。
试剂五：阳性对照，按需配制，-20℃保存。
五、 操作步骤

	空白孔1	测定孔	对照孔2
试剂一（mL）	1		1
试剂二工作液（mL）	1	1	1
试剂三工作液（mL）	1	1
样品（mL）		1	1

充分混匀

试剂四工作液（mL）

1

1

1

充分混匀，室温避光静置5min使之充分反应。560nm处，1cm光径比色杯，采用分光光度计测定吸光值。
¹空白管很重要，建议做3个以上平行；
²如样品颜色较浅可不做对照管

六、计算公式
 
注： 1 如未做对照孔，可以将其视作为0；
2 阳性对照求值时将其视作测定孔进行计算即可。
七、注意事项
1. 如样品中色素物质不是分析对象，建议先通过SEP C18柱进行脱色处理，处理后样品可不做对照孔；
2. 如不确定样品的超氧阴离子自由基清除能力，可先做不同浓度的稀释液进行摸索，并选择适宜浓度进行测定，高浓度下，浓度与清除率间并不线性相关。
3. 试剂三建议全程冰上操作。试剂四切记避光保存，特别是配制后，且应尽快用完。建议在做好一切其它准备工作后再配制试剂四应用液。试剂四正常颜色为黄色，强光照射下，5-10分钟内会变为绿色，随后变为蓝色，变色后试剂不可再用！
4. 试剂二、三应用液和样品混匀后再加入试剂四，次序颠倒会导致不显色。
5. 部分物质会导致显色加深，导致求得的抑制率是负值，如遇到此类现象请先确定该物质是否具有超氧阴离子清除能力，再考虑更换方法，如邻苯三酚自氧化法等进行测试。

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