β-葡萄糖苷酶(β-GC)测试盒酶标板法

β-葡萄糖苷酶β-GC（EC 3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。

测定原理：
β-葡萄糖苷酶β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声破碎仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	粉剂×2 瓶	-20℃
试剂R2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶	2-8℃
标准品	液体×1 支	2-8℃

实验步骤：
注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10个)：提取液体积(mL)为500~1000: 1的比例(建议1000万细菌或细胞加入1mL 提取液)，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次)，15000g，4C条件下离心20min，取上清，置冰上待测。
2、组织的处理：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.2g组织，加入1mL 提取液)，进行冰浴匀浆；15000g，4C条件下离心20min，取上清，置冰上待测。
二、试剂准备
1、试剂R1：临用前取1瓶加入6 mL蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂-20C分装保存4周，避免反复冻融；
2、标准品：5 umol/mL的对硝基苯酚溶液。
三、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、标准液的稀释：临用前将5umolmL标准液稀释至100、50、25、12.5、6.25、0 nmolmL标准溶液待测。
3、标准液稀释可参考下表：

3、标准液稀释可参考下表：

试剂名称(uL)	测定管	对照管	标准管
试剂R1	120	-	-
试剂R2	150	150	-
样本	30	30	-
充分混匀，放入37℃水浴锅/恒温培养箱中准确水浴30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）
试剂R1	-	120	-
充分混匀，8000g，4℃离心5min，取上清液待测
上清液	70	70	-
标准液	-	-	70
试剂R3	130	130	130

充分混匀，室温静置2min后，400nm处测定吸光值A，分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2次。
四、β-GC 酶活的计算
1、标准曲线建立：
根据标准管的浓度（x，nmol/mL）和吸光度（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（y，ΔA测定）带入公式计算样本产物浓度x（nmol/mL）。
2、按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(U/mg prot)=(x×V反总)÷(V样×Cpr)÷T
3、按样本质量计算
单位的定义：每g组织在每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(U/g 质量) = (x×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T
4、按细菌或细胞数量计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(U/104 cell)=(x×V反总)÷(1000×V样÷V样总)÷T
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度需要另外测定；
V反总：反应体系总体积；
V样：加入反应体系中样本体积；
V样总：加入提取液体积；
W：样本质量，g；
1000：细胞或细菌总数，1000万；
T：反应时间，0.5h。

注意事项：
提取液中含有使蛋白变性的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。

本试剂盒仅供科研使用!
上海惠诚生物优势品牌系列: 
药物: TRC  LGC  USP  LKT 
植提标准品: Extrasynthese  PhytoLab  Chromadex  CaroteNature
糖类: Elicityl  TDB  Ludger  Megazyme  Glycarbo
脂类: Nu-Chek  Larodan  Avanti  Matreya
其他: TCI  ERM  Wako  Jackson  Cayman  laysan  Alfa  阿拉丁  麦克林
手机微信：17715331663   QQ:2303607288
 

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特色产品：

生命科学：Crispr系列产品，组织因子，电泳预制胶，荧光染料，核酸探针，大包装新冠抗原抗体，工业用酶

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