磷脂IgA筛查试剂盒（酶联免疫法）
ELISA操作试剂准备过程及问题解答
- 试剂盒和样本不平衡，直接打开后进行检测
- 浓缩试剂如洗涤液等未进行稀释，直接使用；
- 冻干试剂溶解不充分，解冻样本使用前不混匀；
- 标准品稀释不当，酶标试剂配制时间不当
解决办法：
1) 试剂盒使用前应整体取出，在室温下平衡30min后再进行测定；
2) 根据产品标签或说明书要求，对浓缩试剂采用适当的溶剂稀释，并按要求保存或使用；
3) 冻干试剂溶解后，要放置15min左右，使用前再次混匀；冻存样本溶解后，可轻轻振荡混匀，如有颗粒或沉淀，需离心后取上清备用。
4) 标准品如需稀释，按照说明书要求进行，稀释量至少多于加样量的20%。部分酶标试剂要求加样前现配现用，应按照要求配制，避免提前配制导致酶的失活。
通用名称：磷脂IgA筛查试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Phospholipid IgA Screen ELISA
产品货号：RE70421
产品规格：96T
检测样本：血清
公司品牌：德国IBL
储存条件：2-8℃
检测方法：ELISA方法
预期用途：用于组合定性和定量检测人血清中磷脂的IgA抗体
参考价格：询价
供应商家：深圳市科润达生物工程有限公司
磷脂IgA筛查试剂盒预期用途
磷脂IgA筛查试剂盒用于组合定性和定量检测人血清中磷脂的IgA抗体。该测定是系统性红斑狼疮和抗磷脂综合征（APS）患者血栓形成诊断和风险评估的辅助工具。
磷脂前言介绍
针对磷脂，生物膜组分的抗体对磷脂如心磷脂，磷脂酰肌醇，乙存胺，胆碱，鞘磷脂和磷脂酸是特异性的。系统性红斑狼疮患者血清常发现抗磷脂抗体红斑狼疮（SLE）和相关疾病。 在患有SLE和相关疾病的患者中发生抗磷脂抗体是二次抗磷脂综合征（APS）的典型。 相比之下，没有其他自身免疫性疾病的患者中的抗磷脂抗体是主要APS的特征。许多研究表明，这些自身抗体与血栓形成，血小板减少症和习惯性流产的发生率（胎盘梗死的结果）增强相关。 致病性抗磷脂抗体诱导血栓形成的确切机制尚未完全揭示。
磷脂IgA筛查试剂盒检测原理
用1:10稀释的血清样品在包被特异抗原的微孔板中孵育。 患者的抗体（如果存在于标本中）与抗原结合。 在随后的步骤中将未结合的物质洗掉。 之后辣根过氧化物酶（缀合物）缀合的抗人免疫球蛋白与微量培养板中样品的抗原 - 抗体复合物反应。未结合的共轭物在随后的步骤中洗掉。 添加TMB底物产生一个酶促比色（蓝色）反应，其被稀释的酸停止（颜色变化到黄色）。 来自底物的颜色形成的强度是其中的一种与抗原 - 抗体复合物结合的缀合物的量，并且这与患者样品中各抗体的初始浓度成比例。
磷脂IgA筛查试剂盒组成成分
●微孔板——12×8孔——每孔用高度纯化的牛心磷脂，β2-糖蛋白I，磷脂酰丝氨酸，肌醇，乙存胺，胆碱和鞘磷脂包被。
●阴性质控品——1×1.5ml——绿盖，无色，含人血清,BSA ,防腐剂
●阳性质控品——1×1.5ml——红盖，黄色，含人血清,BSA ,防腐剂
●临界标准品——1×1.5ml——蓝盖，黄色，含人血清,BSA ,防腐剂
●标准品——6×1.5ml——白盖，黄色，标准品浓度分别为：0,3,10,30,100,300U/ml，含人血清,BSA ,防腐剂。
●酶联物 IgA——1×15ml——红盖，红色，含HRP标记的抗人免疫球蛋白，BSA等
●TMB底物液——1×15ml——黑盖，无色，内含TMB及H2O2。
●终止液——1×15ml——白盖，无色，内含1M的盐酸，
●洗涤液（50X）——1×20ml——50倍浓缩，白盖，绿色，含tris.Nacl,tw-20,防腐剂
●稀释液（5X）——1×20ml——5倍浓缩，白盖，黄色，含tris.Nacl,BSA,防腐剂
磷脂IgA筛查试剂盒储存条件
磷脂IgA筛查试剂盒应当2~8℃的环境下储存。一旦开封，重组的各试剂在2-8℃可保存一个月，磷脂IgA筛查试剂盒酶标板应在各自标识的日期内使用，TMB溶液应避光。微孔板条一但被拆开，应当将其重新密封好，并加入干燥剂。
磷脂IgA筛查试剂盒检测步骤
●准备好所需试剂。
●根据需要选择定性或定量检测。
●定性检测：每孔加入100ul阴性质控，临界质控，阳性质控和样本；定量检测，每孔加入100ul标准品A-F，阴性质控，阳性质控和样本。
●20-32℃温育30分钟。
●每孔用300μl洗涤液洗板3次（注意：洗板步骤是否操作正确会明显影响实验的灵敏度和精密度。
●在每一微孔中加入100μl酶联物。
●20-32℃温育30分钟。
●每孔用300μl洗涤液洗板3次。
●在每一微孔加TMB底物液100μl。
●20-32℃温育30分钟，避免阳光直射。
●按底物加入非顺序，每孔加100μl终止液以终止底物反应。
●至少孵育5s，并轻轻混匀
●加终止液后30min内在450nm读取OD值。（参照波长：620nm）
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