登革热NS1抗原检测试剂盒(酶联免疫法)
ELISA的加样过程常见的问题和解决方法。
1. 试剂准备过程及问题解答
1)试剂盒和样本不平衡,直接打开后进行检测
2)浓缩试剂如洗涤液等未进行稀释,直接使用;
3)冻干试剂溶解不充分,解冻样本使用前不混匀;
4)标准品稀释不当,酶标试剂配制时间不当
解决办法:
1) 试剂盒使用前应整体取出,在室温下平衡30min后再进行测定;
2) 根据产品标签或说明书要求,对浓缩试剂采用适当的溶剂稀释,并按要求保存或使用;
3) 冻干试剂溶解后,要放置15min左右,使用前再次混匀;冻存样本溶解后,可轻轻振荡混匀,如有颗粒或沉淀,需离心后取上清备用。
4) 标准品如需稀释,按照说明书要求进行,稀释量至少多于加样量的20%。部分酶标试剂要求加样前现配现用,应按照要求配制,避免提前配制导致酶的失活。
问:ELISA的检测方法有哪几种?
答:ELISA的检测方法有间接法、捕获法、竞争法、双抗原夹心法和双抗体夹心法。
通用名称:登革热NS1抗原检测试剂盒
英文名称:Dengue NS1 antigen detection kit
公司品牌:美国cortez
产品货号:8404-25
产品规格:96T
检测样本:血清
储存条件:2—8℃
检测方法:ELISA夹心法
预期用途:仅用于科研,体外检测使用
参考价格:询价
供应商家:深圳市科润达生物工程有限公司
登革热NS1抗原检测试剂盒预期用途
登革热NS1抗原检测试剂盒用于登革热病毒的早期检测,通过酶免分析法检测人血清中的NS1抗原。它可以在IgG和IgM抗体出现之前对人血清中的登革热病毒的进行早期诊断。登革热NS1抗原检测试剂盒不能用于筛查血液或血液成分,仅用于研究。
登革热NS1抗原检测试剂盒简介
登革热是一种急性病毒性疾病,它主要通过埃及伊蚊传播。登革热在临床上主要表现为:双相热、皮疹和造血抑制,还可表现出全身症状,如浑身不舒服、关节痛、肌肉疼痛和头痛,有时还可能出现极为罕见的出血性高烧,并可能导致致命性的休克。登革热主要流行于热带和亚热带地区,大概每年会发生100,000,000例。据统计,每年大概会出现500到1000万例登革热病人,同时还会出现250000到500000例登革热出血热。
登革热NS1抗原检测试剂盒实验原理
登革热NS1抗原检测试剂盒具有高灵敏度,快速和可靠性分析,采用夹心法检测血清中低含量的NS1。
质控和未知血清样品用样品稀释缓冲液稀释。微孔中包被高效的NS1抗体,封闭,样品中的NS1抗原被捕获,与二抗形成夹心。通过辣根过氧化物酶和TMB底物显色液产生的颜色反应来判断NS1抗原,用酸溶液终止反应,然后用酶标仪在450nm处读取吸收值。阴性和阳性血清测得的值作为样品中NS1抗原的诊断依据。
登革热NS1抗原检测试剂盒试剂盒组成
- 微孔板:96孔,2-8℃下保存至有效期
- 阴性质控:1x300µL,有助于试剂盒有效性的验证,2-8℃下保存至有效期,含有沉淀物的话使用前应离心
- 阳性质控:1x300µL,有助于试剂盒有效性的验证,2-8℃下保存至有效期,含有沉淀物的话使用前应离心
- 临界质控:1x300µL,检测临界值,2-8℃下保存至有效期,含有沉淀物的话使用前应离心
- 样品稀释液:1x15ml,含有二抗,Proclin(0.02-0.03%)作为防腐剂,2-8℃下保存至有效期
- 酶联物:1x150µL,100X,含有辣根过氧化物酶标记的多克隆抗体,使用前混匀,2-8℃下保存至有效期
- 酶联物稀释液:1x12ml,用于100X酶连液的稀释,直接将酶联物加入此溶液即得到100X的酶连液,,配制液在2-8℃下可保存2周。未开封的稀释液2 -8℃下保存至有效期。
- 洗涤缓冲液:120ml,10X,2-8℃下保存至有效期
- TMB底物液:1x12ml,2-8℃下保存至有效期
- 终止液:1x6ml,室温下保存至有效期
登革热NS1抗原检测试剂盒实验步骤
所有试剂在使用前都应平衡至室温,混匀。
步骤:
- 阳性、阴性和临界质控设置平行样,未知样品可不设置,90个试验样品可在一块板上进行检测。
- 吸取50μL的样品稀释液至相应的孔内
- 在含有样品稀释液的孔内加入50μl的未稀释血清,混匀
- 盖板,37℃下孵育1h
- 每孔加入300μL的1X洗涤液,全自动洗板机洗板6次
- 用多通道移液器每孔加入100μL的酶连液,丢弃剩余的酶连液或者是保存在2-8℃下至2周
- 盖板,37℃下孵育30min
- 全自动洗板机洗板6次
- 每孔加入100μL的TMB底物液
- 黑暗处,室温下孵育20min
- 每孔加入50μL的终止液,不盖板,室温下放置1min
- 酶标仪450nm处读取数据
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