细胞增殖（MTT或CCK8）技术服务

细胞增殖（MTT或CCK8）技术服务

理论支持：

MTT法（四甲基偶氮唑盐比色法）可通过快速简便的颜色反应来检测细胞存活数量。其原理是线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色的针状甲月替(Formazan)结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜 (DMSO)溶解，酶联免疫检测仪检测OD570nm值可间接反映活细胞的数量及其活性。

 

服务内容：

1、检测细胞活性：细胞毒性实验；

2、药物的筛选：包括药物剂量及给药时机的筛选，评价药物的安全性等；

3、一些蛋白分子、细胞因子的活性检测。

 

具体操作：

1、对数生长期的贴壁细胞，用胰酶消化后，根据细胞大小，按照1×10³～5×10⁴细胞/孔接种于96孔板，使用的培养基为细胞的完全培养基；

对数生长期的悬浮细胞，离心收集后，根据细胞大小，按照1×10³～5×10⁴细胞/孔接种于96孔板，使用的培养基为细胞的完全培养基；

2、 将96孔板置于37℃、5%CO2湿度培养箱中培养24小时后，进行处理：

分别设立阴性对照、阳性对照和实验组：

阴性对照：不做任何处理，加入完全培养基100μl；

阳性对照：加入100μl含阳性药物或ConA的完全培养基；

实验组：加入100μl含待测样本的完全培养基；

每一样本的每一浓度平行三复孔；

3、将96孔板重新置于37℃、5%CO2湿度培养箱中继续培养，根据实验的要求，分别于不同的时间点（24h、48h、72h或96h）进行MTT或CCK8检测；

4、贴壁细胞的MTT检测：

（1）每孔加入20μl的5mg/ml的MTT，于37℃、5%CO2湿度培养箱中温育4小时；

（2）轻轻吸去上清液，每孔加DMSO 200μl，振荡器振荡10min，酶标仪测定光密度值(OD)；

悬浮细胞的MTT检测：

（1）每孔加入20μl的5mg/ml的MTT，于37℃、5%CO2湿度培养箱中温育4小时；

（2）1500rpm×5min离心，轻轻吸去上清液，每孔加DMSO 200μl，振荡器振荡10min，酶标仪测定光密度值(OD)；

悬浮细胞的CCK8检测：

（1）每孔加入5～10ml的CCK8检测试剂，于37℃、5%CO2湿度培养箱中温育2～4小时；

（2）酶标仪测定光密度值(OD)；

5、进行相关统计分析；

客户须知：

1、客户需要提供相关的实验设计：包括作用时间、样本浓度等；

2、实验周期为3～4周，视具体实验内容及检测细胞而定；

3、对于悬浮细胞，客户可选择采用MTT法或CCK8法。

服务价格：

    询价。

 

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