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| 销售商： 北京凯诺春天生物技术服务部 | 查看该公司所有产品 >> |
Real-time PCR技术服务
理论支持：
Realtime-PCR（荧光定量PCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。通常可以分为荧光探针和荧光染料两种：
（1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。
（2）SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
服务内容：
1、目的基因表达的定性和定量分析（相对定量和绝对定量）；
2、基因芯片的结果验证；
具体操作：
一、定性分析：
1、将得到的样品（组织或细胞）进行RNA提取，并反转录成cDNA（必须设立阴性对照和阳性对照，操作同样品）；
2、进行Real-time检测（操作同下）；
二、定量分析：
（一）相对定量
1、将得到的样品（组织或细胞）进行RNA提取，并反转录成cDNA（必须设立阴性对照和阳性对照，操作同样品）；
2、分别选取阴性对照、阳性对照及部分样品为模板，采用内参和目的基因的引物（一般为b-actin和GAPDH）进行普通PCR，琼脂糖凝胶电泳观察结果，明确扩增产物的特异性；
3、Real-time检测：
（1）如采用SYBR荧光染料，为每一样品分别设立内参组和目的基因组，各为三复孔；如采用荧光探针，可在同一孔内进行内参和目的基因的表达，设立三复孔；
（2）加样后上机检测，并完成融解曲线的检测；
（3）分析结果：溶解曲线分析引物特异性；
根据ct值计算相对定量值；
（二）绝对定量
1、将得到的样品（组织或细胞）进行RNA提取，并反转录成cDNA（必须设立阴性对照和阳性对照，操作同样品）；
2、分别选取阴性对照、阳性对照及部分样品为模板，采用内参和目的基因的引物（一般为b-actin和GAPDH）进行普通PCR，琼脂糖凝胶电泳观察结果，明确扩增产物的特异性；
3、Real-time检测：
（1）检测各样品的内参，以调整各样本DNA总量达到一致；或通过紫外分光光度法测定DNA的含量，调整DNA总量达到一致；
（2）将标准品按梯度稀释后，进行目的基因的检测，制备ct值和目的基因拷贝数相互关系的标准曲线；
（3）将样品进行目的基因的检测后，根据标准曲线计算目的基因的含量；
（3）分析结果：溶解曲线分析引物特异性；
根据ct值计算目的基因的定量值；
三、基因芯片结果验证
1、将得到的样品（组织或细胞）进行RNA提取，并反转录成cDNA（必须设立阴性对照和阳性对照，操作同样品）；
2、进行相对或绝对定量分析，明确目的基因表达的改变；
客户须知：
1、本公司采用SYBR的检测试剂购自TaKaRa，如客户使用探针，建议从TaKaRa或Invitrogen公司定购；
2、本公司的Real-time仪能够同时在1个孔中检测四个指标；
服务价格：询价
