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| 销售商： 北京凯诺春天生物技术服务部 | 查看该公司所有产品 >> |
理论支持：
1、脂质体转染
原理：将需转移的DNA或RNA包裹于脂质体，通过脂质体与细胞膜的融合将DNA或RNA转入宿主细胞内。 因此，细胞膜通透性高的细胞，脂质体复合物较易进入，转染效率较高；而有的细胞系本身就不容易被转染。
2、电穿孔转染
原理：电流能可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内。优势：细胞范围广，无论悬浮细胞还是贴壁细胞，均能被有效转染。缺点：高电场强度会对细胞具有较强的杀伤效应。
目前本公司正在引进更为先进的电穿孔仪，能够有效减轻对细胞的杀伤作用。
3、腺病毒感染
对于脂质体和电穿孔都无法转染的细胞，可采用腺病毒感染的方式进行目的分子的导入。优点：感染效率高。缺点：只能瞬时表达。
服务内容：
一、确认细胞对质粒载体或腺病毒载体的转染效率
二、转染携带目的基因的质粒载体，G418筛选（或流式细胞分选）后建立稳定表达细胞株
三、对携带目的基因的载体（质粒载体或腺病毒载体）进行相关检测实验
具体操作：
一、细胞转染效率的确定：
1、将目的细胞以合适的数目接种于24孔板中（一般为1×105细胞/孔）；
2、第二天转染质粒载体（携带报告基因EGFP）：采用的脂质体购自Invitrogen公司；
或感染携带报告基因EGFP的腺病毒载体；
3、感染后48h流式细胞检测EGFP的表达，明确其转染或感染效率；
（携带报告基因EGFP的载体可由本公司提供）
二、稳定表达细胞株的建立
1、将转染后的细胞按照一定的比例接种到6孔板中（一般选用1：10和1：100两个梯度），分别采用
以转染携带EGFP质粒载体的细胞作为阳性对照，以未转染质粒载体的细胞作为阴性对照；
2、每3～4天换液一次；
3、筛选20～30天，即可得到稳定表达细胞株；
4、传代后，以一定的G418浓度维持培养；
三、对携带目的基因的载体（质粒载体或腺病毒载体）进行相关检测实验
检测项目：
（一）蛋白表达的检测
1、流式细胞检测膜蛋白的表达；
2、ELISA检测分泌型蛋白的表达；
3、Western-blot检测其他蛋白的表达；
（二）细胞凋亡检测（流式细胞检测）
见相关章节
（三）细胞增殖检测（MTT法或CCK8法）
见相关章节
（四）细胞迁移检测
见相关章节
（五）信号通路研究（Western-blot或Real-time）
见相关章节
客户须知：
1、为保证得到理想的实验结果，转染效率必需达到60％以上才能进行后续实验；如低于50%建议进行G418的稳定筛选，或流式细胞仪筛选。
2、本公司提供的转染试剂为Invitrogen公司，也可由客户提供（但不能保证转染效率）。
3、G418筛选时间视细胞性能而定；对于悬浮细胞，建议使用流式细胞仪进行筛选。
4、具体实验周期和实验方案，根据客户需要及时进行沟通和调整。
服务价格：
根据客户实验而定
