人骨髓间充质干细胞成脂诱导分化培养试剂盒

一、 产品基础信息
名称：人骨髓间充质干细胞成脂诱导分化培养试剂盒。
产品编号：S-06-006

二、产品简介
本产品由赛莱拉干细胞科技股份有限公司技术中心研发团队潜心研发优化的人骨髓间充质干细胞成脂诱导分化培养试剂盒。包括间充质干细胞成脂分化基础培养基、人骨髓间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒和油红O染色液。 本产品仅用于科研，不可用于临床治疗、诊断及其他用途。

三、主要组成成分包括
间充质干细胞成脂分化基础培养基 112mL 4℃
人骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒 试剂A：125uL；试剂B：125uL；试剂C：125uL；试剂D：125uL；试剂E：12.5mL。 -20℃
油红O染色液 染色液A：10mL；染色液B：4mL。 RT

四、使用说明
1、配液前30 min左右，人骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒中试剂A、试剂B、试剂C、试剂D和试剂E预先放置室温溶解，可短暂离心（2000g），以确保试剂能全部收集。
2、于超净台内无菌环境打开基础培养基和五种试剂的瓶/管盖。
3、将试剂A、试剂B、试剂C、试剂D和试剂E全部加入成脂分化基础培养基中。可吸取少量基础培养基洗涤各试剂管，以确保五种试剂充分利用。
4、充分混匀后即可使用。
5、油红O染色液配制：染色液A与染色液B按5:2的比例，充分混匀后，中性滤纸过滤即可使用（染色液配制后，需在两个小时内使用）。
注：本试剂盒中的每个成分均为无菌分装，但为确保完全无菌，也可以将混合后的完全培养基进行再次过滤除菌（0.22 μm滤膜）。

五、产品稳定性及保存条件
1、间充质干细胞成脂分化基础培养基置于2-8℃保存，保质期为1年；
2、人骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒置于-20℃保存，保质期为2年；
3、完全培养基配制好后于2-8℃保存，保质期为1个月。
4、油红O染色液室温保存，保质期1年。
5、保质期内使用。
6、避免反复冻融相关产品。

六、质量控制
人骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒已使用人骨髓间充质干细胞进行性能测试。
主要的鉴定标准包括：
1、无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）
2、内毒素检测
3、渗透压检测
4、pH测试

七、产品使用示例
（以六孔板为例）实验操作流程：
1、人骨髓间充质干细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中常规培养。
2、当细胞融合度达到80-90%时，用0.25%Trypsin-0.04%EDTA进行消化。
3、将消化下来的人骨髓间充质干细胞按照2×104 cells/cm2 的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入2 mL完全培养基。
4、将细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中进行培养。
5、当细胞完全融合后，小心吸弃旧培养基，加入2 mL配制好的人骨髓间充质干细胞成脂分化完全培养基。
6、每隔3天换用新鲜的人骨髓间充质干细胞成脂分化完全培养基。
7. 诱导2-3周左右，观察脂滴形成情况，用油红O红进行染色。

八、油红O染色步骤
1、吸弃六孔板中的培养基， 1×PBS冲洗2-3次。每孔加入2 mL 4%多聚甲醛溶液，固定15-20 min。
2、吸弃4%多聚甲醛溶液， 1×PBS冲洗3-4次。每孔中加入1 mL配制好的油红O染液染色15 min左右。
3、吸弃油红O染液，1×PBS冲洗2-3次。
4、于显微镜下观察成脂染色效果。

九、染色效果实例图片：

成脂分化组 阴性对照组
（人骨髓间充质干细胞）

温馨提示：不可用于临床治疗。