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Cre与Flp病毒 | 特点 |
AAV-hSyn-mCherry-IRES-WGA-cre | hSyn是神经元特异启动子 |
AAV-hSyn-Cre-EGFP | |
AAV-CMV bGlobin-Cre-eGFP | CMV非特异强启动子 |
AAV-Ef1a-mCherry-IRES-Cre | Ef1α是非特异强启动子 |
AAV-cTNT-iCre | cTNT肌钙蛋白启动子 |
AAV-EF1a-dDIO-CRE-EGFP | Dre依赖的Cre病毒 |
AAV-CAG-FLEX-FlpO | Cre依赖的Flpo病毒,Flpo是进过密码子优化的Flp |
AAV-hSyn-Flpo | |
AAV-hSyn-Flpo-eGFP |
Cre-loxP系统介绍
Cre-loxP是一种位点特异的基因重组技术,被广泛应用于特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位,在真核生物和原核生物中均有广泛应用。
Cre-loxP的基本原理
Cre蛋白是一种重组酶,于1981年从P1噬菌体中被发现。Cre重组酶基因编码区序列全长1029bp,编码38kDa蛋白质,Cre重组酶是由343个氨基酸组成的单体蛋白。
LoxP位点,位于P1噬菌体中的34bp序列,由两个13bp的反向回文序列和8bp的中间间隔序列共同组成,间隔序列决定loxP的方向。
Cre-loxP诱导基因重组的几种方式
当细胞基因组内存在两个loxP位点时,一旦有Cre重组酶出现,就会诱导两个loxP位点间的序列发生重组。重组的结果取决于两个loxP位点的方向,主要有以下几种可能:
1. 如果两个loxP位点位于一条DNA链上,且方向相同,Cre重组酶能有效地敲除两个loxP位点间的序列(下图左);
2. 如果两个loxP位点位于一条DNA链上,但方向相反,Cre重组酶能诱导两个loxP位点间的序列翻转(下图中);
3. 如果两个loxP位点分别位于两条不同的DNA链或染色体上,Cre酶能诱导两条DNA链的交换或染色体易位(下图右)。
Cre-loxP系统的优点
在当今世界上,Cre-loxP系统是在神经系统中应用最广泛的条件性基因敲除工具,主要是因为该系统有如下优点:
1. 高效性:Cre重组酶与具有loxP位点的DNA片段形成复合物之后,可以提供足够的能力引发之后的DNA重组过程,重组过程简约高效;
2. 特异性强: loxP序列的唯一性,保证基因重组的特异性;
3. 可应用范围广:Cre重组酶是可以在生物体不同的组织、不同的生理条件下发挥作用;
4. 可由二型启动子启动表达:Cre重组酶的编码基因可由任何一种二型启动子驱动,由此保证Cre重组酶在生物体不同的细胞、组织、器官或者在不同的发育阶段或不同的生理条件下表达,从而实现较高的组织和细胞特异性。