Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒

Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI Bradford 蛋白质浓度定量试剂是一种旨在使用考马斯亮蓝染色剂G－250 与可溶性蛋白质特异性

结合产生色彩差异变化，通过比色测定其最大吸收转换来定量蛋白质浓度的权威而经典的技术方法。该技

术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种蛋白质（动物、人体、植物、微生物等）的

含量检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感，定量精确。

技术背景

考马斯亮蓝染料G－250（Coomassie Brilliant Blue G－250）是一种与蛋白质结合的化学染料。它的三苯甲

烷（triphenylmethane）基团，主要与蛋白质的非极性结构结合。而它的阴离子磺酸盐（anion sulfonate）基

团与蛋白质分子的阳离子和芳香类氨基酸，尤其是精氨酸和赖氨酸侧链的结合。在酸性环境下，其最大吸

收波长从465nm转换为595nm。Bradford提出的方法的最大优点在于不受样品中各种化学成分的干扰。较之

Lowry，Hartree-Lowry和 BCA技术，更为敏感。

产品内容

YIJI 反应液（Reagent A） 毫升

YIJI 标准液（Reagent B） 毫升

YIJI 补充液（Reagent C） 毫升

产品说明书 1 份

保存方式

保存YIJI 标准液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，YIJI 反应液（Reagent

A），避免光照；有效保证 6 月

用户自备

48 孔板：用于样品比色的容器

比色杯：用于样品比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

一、48 孔板微量测定

A．建立标准样品曲线

1．将－20℃冰箱里试剂盒中的YIJI 标准液（Reagent B）置入冰槽里融化

2．准备1 个48 孔板，做好相应的标记

1

3．按下表配制标准样品反应液

1）分别移取适量的 YIJI 标准液（Reagent B）到 48 孔板里指定序号的样品孔里

2）分别移取适量的 YIJI 补充液（Reagent C）到 48 孔板里指定序号的样品孔里

3）最后分别加入 100 微升 YIJI 反应液（Reagent A）

序号 YIJI 标准液 YIJI 补充液 YIJI 反应液 标准样品蛋白质含量

（Reagent B） （Reagent C） （Reagent A） （微克）

1 25 微升 375 微升 100 微升 25

2 12.5 微升 387.5 微升 100 微升 12.5

3 10 微升 390 微升 100 微升 10

4 5 微升 395 微升 100 微升 5

5 2.5 微升 397.5 微升 100 微升 2.5

6 1.25 微升 398.75 微升 100 微升 1.25

7 0 400 微升 100 微升 0

4．轻轻摇动 48 孔板，混匀反应物

5．室温下暗室里孵育 5 分钟

6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 595nm

7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值 OD₅₉₅，横座标（X）为蛋白质含量（微克）

B．样品测定

1．将待测样品置入冰槽里融化

2．分别移取 100 微升待测样品到 48 孔板里指定序号的样品孔里（注意：参见注意事项 4）

3．分别移取 300 微升 YIJI 补充液（Reagent C）到 48 孔板里指定序号的样品孔里

4．最后分别加入 100 微升 YIJI 反应液（Reagent A）

5．轻轻摇动 48 孔板，混匀反应物

6．室温下暗室里孵育 5 分钟

7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 595nm

8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以 100 微升（样品量），获得待测样品的实际浓度

（微克/微升）（注意：参见注意事项 5）

二、比色杯标准测定

A．建立标准样品曲线

1．将－20℃冰箱里试剂盒中的 YIJI 标准液（Reagent B）置入冰槽里融化

2．准备好 1 毫升比色杯

3．按下表配制标准样品反应液

1）分别移取适量的 YIJI 标准液（Reagent B）到 1 毫升比色杯

2）分别加入适量的 YIJI 补充液（Reagent C）

3）最后分别加入 200 微升 YIJI 反应液（Reagent A）

序号 YIJI 标准液 YIJI 补充液 YIJI 反应液 标准样品蛋白质含量

（Reagent B） （Reagent C） （Reagent A） （微克）

1 50 微升 750 微升 200 微升 50

2 25 微升 775 微升 200 微升 25

3 20 微升 780 微升 200 微升 20

4 10 微升 790 微升 200 微升 10

2

5 5 微升 795 微升 200 微升 5

6 2.5 微升 797.5 微升 200 微升 2.5

7 0 800 微升 200 微升 0

4．轻轻上下倾倒比色杯，混匀反应物

5．室温下暗室里孵育 5 分钟

6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 595nm

7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值 OD₅₉₅，横座标（X）为蛋白质含量（微克）

B．样品测定

1．将待测样品置入冰槽里融化

2．移取 200 微升待测样品到 1 毫升比色杯里 （注意：参见注意事项 4）

3．加入 600 微升 YIJI 补充液（Reagent C）

4．加入 200 微升 YIJI 反应液（Reagent A）

5．轻轻上下倾倒比色杯，混匀反应物

6．室温下暗室里孵育 5 分钟

7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 595nm

8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以 200 微升（样品量），获得待测样品的实际浓度

（微克/微升）（注意：参见注意事项 5）

三、玻璃管大量测定（注意：参见注意事项 2）

A．建立标准样品曲线

1．将－20℃冰箱里试剂盒中的 YIJI 标准液（Reagent B）置入冰槽里融化

2．准备好 5 毫升玻璃管

3．按下表配制标准样品反应液

1）分别移取适量的 YIJI 标准液（Reagent B）到 5 毫升玻璃管

2）分别加入适量的 YIJI 补充液（Reagent C）

3）最后分别加入 1 毫升 YIJI 反应液（Reagent A）

序号 YIJI 标准液 YIJI 补充液 YIJI 反应液 标准样品蛋白质含量

（Reagent B） （Reagent C） （Reagent A） （毫克）

1 4 毫升 0 1 毫升 4

2 2.5 毫升 1.5 毫升 1 毫升 2.5

3 2 毫升 2 毫升 1 毫升 2

4 1 毫升 3 毫升 1 毫升 1

5 0.5 毫升 3.5 毫升 1 毫升 0.5

6 0.25 毫升 3.75 毫升 1 毫升 0.25

7 0 4 毫升 1 毫升 0

4．涡旋震荡，混匀反应物

5．室温下暗室里孵育 30 分钟

6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 595nm

7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值 OD₅₉₅，横座标（X）为蛋白质浓度（毫克）

B．样品测定

1．将待测样品置入冰槽里融化

2．移取 250 微升待测样品到 5 毫升玻璃管里

3

3．加入 3.75 毫升 YIJI 补充液（Reagent C）

4．加入 1 毫升 YIJI 反应液（Reagent A）

5．涡旋震荡，混匀反应物

6．室温下暗室里孵育 30 分钟

7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 595nm

8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以 0.25 毫升（样品量），获得待测样品的实际浓

度（毫克/毫升）

注意事项

1． 本产品为 200 次（96 孔板测定），100 次操作（48 孔板测定），50 次操作（比色杯测定）包括标准曲线

2． 玻璃管大量测定须另购 YIJI Bradford 大量蛋白质浓度定量试剂盒（YJ30030.2）

3． 操作时，须戴手套

4． 建议用户使用 48 孔板微量测定时样品和试剂的用量，以及在最后浓度计算时的除数

序号 待测样品 YIJI 补充液 YIJI 反应液 蛋白浓度计算的除数

（Reagent C） （Reagent A）

1 5 微升 395 微升 100 微升 5

2 50 微升 350 微升 100 微升 50

3 100 微升 300 微升 100 微升 100

4 250 微升 150 微升 100 微升 250

如果是 96 孔板测定：待测样品、YIJI 补充液（Reagent C）和 YIJI 反应液（Reagent A）的用

量是 48 孔板测定的二分之一

如果是比色杯测定：待测样品、YIJI 补充液（Reagent C）和 YIJI 反应液（Reagent A）的用

量是 48 孔板测定的 2 倍

5． 样品浓度计算公式：

标准曲线求得蛋白含量（微克）÷样品量（微升）＝微克/微升

6． 加样后即刻比色测定

7． 比色测定后，比色杯须清洗彻底

8． 强碱性样品将会干扰比色检测

9． 下列化学成分和浓度范围不会干扰比色检测：

Acetate 0.6 M KCI 1.0 M

Acetone Malic acid 0.2 M

Adenosine 1 mM MgCl₂ 1.0 M

Amino Acids Mercaptoethanol 1.0 M

Ammonium sulfate 1.0 M MES 0.7 M

Ampholytes Methanol 0.5％

Acid MOPS 0.2 M

ATP 1 mM NaCl 5 M

Barbital NAD 1 mM

BES 2.5 M NaSCN 3 M

Boric acid Peptones

Cacodylate-Tris 0.1 M Phenol 5%

CDTA 0.05 M Phosphate 1.0 M

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