石蜡切片游离胆固醇毛地黄皂苷法舒尔茨直接

石蜡切片游离胆固醇毛地黄皂苷法（DIGITONIN）舒尔茨直接染色试剂盒

产品说明书（中文版）

 

主要用途

 

石蜡切片游离胆固醇毛地黄皂苷法（DIGITONIN）舒尔茨直接染色试剂是一种旨在通过特殊脱蜡处理和毛地黄皂苷特异性与游离胆固醇反应产生的不溶性产物，进而使用铁矾氧化和混合酸还原，形成短暂性蓝绿色显色，分析石蜡包埋组织切片中（最大程度保留的）游离胆固醇的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良舒尔茨经典方法、成功实验证明的。主要适用于各种人体和动物组织石蜡切片中游离胆固醇的特异检测。广泛用于组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色敏感。

 

技术背景

 

胆固醇（cholesterol）是一类称之为固醇类（sterols）或聚类异戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多环化合物（polycyclic compound）。其分子式为cholest-5-en-3β-ol。胆固醇以游离（free form）和脂化结合（ester）两种形式广泛存在于所有动物组织中，主要以非脂化形式存在于细胞膜中。在膜功能和脂代谢以及激素合成中起着重要作用。毛地黄皂苷（digitonin）与游离胆固醇反应产生不溶性复合物，通过脂溶性有机溶剂分离出游离胆固醇，然后通过舒尔茨（Schultz Reaction）染色技术，即铁矾氧化和混合酸还原呈现针尖样晶体状蓝蓝色色素沉积。由于石蜡包埋的组织切片在去石蜡的过程中，有机溶剂诸如二甲苯等容易破坏和减少组织中的胆固醇成分，因此使用非二甲苯类脱蜡，以最大程度保护组织中的胆固醇成分是舒尔茨染色的关键。

 

产品内容

 

脱蜡液（Reagent A）          毫升

净化液（Reagent B）   毫升

清理液（Reagent C）   毫升

沉淀液（Reagent D）   毫升

萃取液（Reagent E）   毫升

氧化液（Reagent F）   毫升

强化液（Reagent G）   毫升

稳定液（Reagent H）   毫升

染色液（Reagent I）   毫升

产品说明书   1份

 

保存方式

 

保存沉淀液（Reagent D）在-20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；氧化液（Reagent F），避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月 

 

用户自备

 

培养箱：用于样品反应孵育

光学显微镜：用于样品染色后观察分析

 

实验步骤

 

一、样品脱蜡处理

 

• 取出待测的6微米厚的石蜡包埋的组织切片
• 放进80℃烘箱，孵育30分钟
• 室温下静置15分钟
• 小心加上xx微升脱蜡液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心移去切片上的脱蜡液（Reagent A）
• 重复实验步骤4至6一次
• 小心加上xx微升净化液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心移去切片上的净化液（Reagent B）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育3分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent C）
• 小心加上xx微升沉淀液（Reagent D）在载玻片上，铺满整个样品表面
• 室温下孵育2小时（注意：避免干枯）
• 小心移去载玻片上的沉淀液（Reagent D）
• 小心加上xx微升萃取液（Reagent E）在载玻片上，铺满整个样品表面
• 室温下孵育1小时（注意：避免干枯）
• 小心移去载玻片上的萃取液（Reagent E）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent C）在载玻片上，铺满整个样品表面
• 小心移去载玻片上的清理液（Reagent C）

二、样本染色处理

• 小心加上xx微升氧化液（Reagent F），铺满整个载玻片样品表面
• 37℃湿润培养箱孵育4小时，避免光照和干化
• 小心移去载玻片上的氧化液（Reagent F）
• 小心加上xx微升强化液（Reagent G）
• 室温下孵育20分钟
• 小心移去载玻片上的强化液（Reagent G）
• 重复实验步骤4至6二次
• 小心加上xx微升清理液（Reagent C），清洗样品表面
• 小心移去载玻片上的清理液（Reagent C）
• 小心加上xx微升稳定液（Reagent H）
• 室温下孵育10分钟
• 小心移去载玻片上的稳定液（Reagent H）
• 空气中晾干
• 小心加上xx微升预冷的染色液（Reagent I），铺满整个载玻片样品表面
• 即刻放上盖玻片
• 在一般光学显微镜下观察：游离胆固醇阳性呈现蓝绿色

 

注意事项

 

• 本产品为50次操作
• 试剂含有腐蚀性酸性物质，注意操作安全
• 操作时，须戴手套
• 操作时，避免污染母液
• 建议使用玻璃染色缸，除说明书规定之外
• 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
• 染色后数分钟至数小时，切片蓝绿色会褪色甚至消失
• 样品染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 
• 本公司提供系列组织细胞胆固醇染色试剂产品

 

质量标准

 

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰

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