冰冻切片组织碱性磷酸酶活性染色试剂盒

冰冻切片组织碱性磷酸酶活性染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI冰冻切片组织碱性磷酸酶活性染色试剂是一种旨在使用偶联偶氮技术，在底物存在的情况下，分析组织样本中碱性磷酸酶表达，而呈现亮红色沉淀现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于动物组织冰冻切片，同时也适合原生代或培养细胞的酶活性检测。尤其可用于骨组织病理生理的研究和干细胞分化能力的鉴定。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，灵敏牢固，显色清晰。

 

技术背景

碱性磷酸酶（ALKALINE PHOSPHATASE）在碱性环境下催化各种醇和酚的磷酸酯水解，存在于活跃运输的膜上，如毛细血管及毛细血管的动脉部分的内皮，肾近曲小管壁边缘和小肠上皮的纹状缘，胎盘组织，未分化的干细胞等表达含量最为丰富。它与骨质的形成，维持细胞内磷酸酶的浓度，以及与经膜吸收和转运过程有关。偶联偶氮技术的基本原理为碱性磷酸酶水解底物（磷酸萘酯）释放出萘酚，立即为重氮盐所捕获而成为不溶性有色的偶氮染料。实验最初（1944）应用β-萘磷酸盐作为底物，释放出的萘酚与重氮α-萘胺偶联，在酶的活动处形成有色沉淀。Burstone （1962）推荐使用替代萘酚，如萘酚AS-MX磷酸盐。重氮盐有很多种，但较适宜的有Fast blue RR，Fast red TR，Fast violet B，Fast blue VRT 和Fast black B。偶联偶氮技术孵育时间短；稳定，灵敏；在正常组织中因无萘酚，故不需要对照；反应产物为偶氮染料难以溶解，不易弥散因而图象清晰。

产品内容

 

YIJI清理液（Reagent A）  毫升

YIJI固着液（Reagent B）  毫升

YIJI反应液（Reagent C）  毫升

YIJI染色液（Reagent D）  管

产品说明书  1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里，避免光照，有效保证6月

 

用户自备

 

甲基绿复染试剂盒（YIJI40010）或苏木素复染试剂盒（YIJI80050）：用于常规染色后复染

小型染色缸：用于染色操作

光学显微镜：用于组织细胞染色后观察分析

 

 

 

实验步骤

 

样本染色操作开始前，将试剂盒里的YIJI反应液（Reagent C）和YIJI染色液（Reagent D）置于室温下预热，并避光。然后移取xx毫升YIJI反应液（Reagent C）到YIJI染色液（Reagent D）管里，充分混匀后，标记为YIJI染色工作液，即刻使用。

 

• 样本固着处理

 

• 取出待测的5至10微米厚的冰冻组织切片或细胞载玻片
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A）在切片或载玻片上，铺满整个样品表面
• 小心移去载玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升－20℃预冷的YIJI固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
• 放进－20℃冰箱里，孵育5分钟
• 小心移去切片或载玻片上的YIJI固着液（Reagent B）
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗样品表面
• 小心移去切片或载玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 重复实验步骤7至8一次

二、样本染色处理

• 小心加上xx微升YIJI染色工作液，铺满整个切片或载玻片样品表面
• 室温下暗室里孵育30至60分钟；或直至可见红色
• 小心移去切片或载玻片上的YIJI染色工作液
• 室温下，小心将切片或载玻片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去切片或载玻片上的YIJI清理液（Reagent A）

 

• 样本复染处理（选择步骤）

 

• 样本复染处理（甲基绿或苏木素）
• 放上盖玻片或封片
• 即刻在一般光学显微镜下观察：酶活性细胞呈现粉红或红色，背景黄色，核为蓝色

 

注意事项

 

• 本产品为50次操作
• 操作时，须带手套
• YIJI染色工作液配制后，5分钟内使用，不得久置
• YIJI染色工作液根据需要配制，每管可以染色10个样本
• 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
• YIJI固着液（Reagent B）须－20℃预冷
• 如果样品中酶活性较低，细胞染色可以在37℃环境下进行
• 组织细胞染色注意不要过度
• 直接封片处理，不要使用有机溶剂（乙醇、二甲苯等），否则会使染色褪色
• 组织细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 
• 本公司提供系列组织细胞酶活性染色试剂产品

 

质量标准

 

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰

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